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高压液相色谱法同时测定食品中的6种食品添加剂 在日常食品中，有一种薄膜色谱法和一种高压液相色谱法。由于高压液相色谱法所需的设备有限，样品检测需要很长时间。涂层层析法是一种半定量分析法。作者应用微机极谱法同时测定食品中的苋菜红、日落黄、柠檬黄、胭脂红,对底液的组成、线性范围、稳定性、检出限、精密度、准确度、共存物等进行研究。该方法简单、易行,结果准确、可靠,便于推广应用。用于实际样品测定,结果令人满意。 1 材料和方法 1.1 仪器和试剂 1.1.1 1.1.2 kh2po4溶液 磷酸盐底液(pH=7.0)称取13.60gKH2PO4,1410gNaH2PO4,10.00gNaCl,加蒸馏水溶解并稀释1000ml。 1.1.3 bw3000细胞红浓度 标准溶液购于国家标准物质研究中心,柠檬黄(GBW100001)、苋菜红(GBW100002)、日落黄(GBW100003)、胭脂红(GWB100004)浓度均为1.00mg/ml。 1.1.4 标准使用液的配制 标准应用液准确吸取标准柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红,用蒸馏水稀释成100.00μg/ml混合色素标准使用液。 1.2 方法 1.2.1 样品处理 (1) 液体样品 (2) 固体样品 (3) 高脂肪和高蛋白质的食物 吸取样品处理液适量于10ml比色管中,加入5.00ml底液,蒸馏水到10.00ml供测定用。 1.2.2 峰电流ip法检测各色素 取样品处理液适量于10ml比色管中,同时做试剂空白。加入底液5.00ml混匀,用蒸馏水稀释至刻度。选择起始电(Eo)-0.10V,终止电位(Es)-0.90V,三电极系统,1.5次微分,扫描速度250mv/S在峰电位(Ep)-0.350V、-0.420V、-0.500V、-0.590V(VS·SCE)处测量苋菜红、日落黄、柠檬黄、胭脂红的峰电流(Ip),用标准曲线回归法计算样品中各色素的含量。 1.2.3 标准曲线的生产 准确吸取混合色素标准使用液0.00,0.10,0.20,0.30,0.50ml同“1.2.2”。 1.2.4 试剂空白中检出的色素含量,a0,g 式中:X:样品中的色素含量,g/Kg;从标准曲线中查出的色素含量,(μg):A0:试剂空白中查出的色素含量,(μg);m:样品质量,(g);V1:样品定容体积,ml;V2:分析用样品体积,ml。 2 结果与讨论 2.1 极谱波的测定 四种混合色素均为5.00μg时,在磷酸盐缓冲液(pH=7.0),NH4Cl-NH3H2O(pH=0.6),0.6mol/L KH2PO4和0.005mol/L NaH2PO4(pH=8.50)介质中,均有极谱波。但在磷酸盐缓冲液(pH=7.0)有一灵敏的吸附波,峰形对称而稳定,见图1。 2.2 试验缓冲液ph值 固定混合色素含量均为5.00μg时,按单因素变量法对不同加入量的磷酸盐缓冲液(pH=7.0)进行试验。试验结果表明用量为4.00ml-6.00ml:4种色素的峰电流增加,但均在5.00ml以后峰电流稳定不变,故选用5.00ml为佳。 2.3 峰电流的稳态 配制不同浓度的色素标准,用本法按不同时间进行重复测定,观察峰电流的变化。结果表明,在24h内峰电流基本稳定不变。 2.4 初始电位对峰电流的影响 试验表明在磷酸盐缓冲液(pH=7.0)介质中,峰电流与起始电位有关。起始电位负移,峰电流减小,本文选定-0.10V。 2.5 扫描速度对抗光强的影响 扫描速度为200-300mV/S时,峰电流随扫描速度增大而逐渐增大,250mV/S以后无明显增加,本文选定扫描速度为250mV/S。 2.6 线性范围和检出限 2.6.1 定峰电流 不同时间配制4个不同浓度的色素标准溶液,按本法测定峰电流,其线性范围为0.00-100.00μg/10ml。在0.00-50.00μg/10ml范围内,制做标准曲线,回归方程,相关系数r分别见表1。 2.6.2 极谱波的产生 本法标准系列“0“管无极谱波峰,当加入2.00μg时,有极谱波。不同时间测定20次,计算峰电流标准差,按1975年IUPAC规定L=3S/m计算,检出限均为0.50mg/L。 2.7 准确度和精度 2.7.1 方法标准,测定总标准差及样品稳定性 对高、中、低3种不同浓度色素标准溶液及样品重复5次测定,标准差(S)为0.89～6.54,相对标准差(RSD)为2.12%～6.78%。结果见表2。 2.7.2 与对标准差试验 利用标准加入法做回收试验,每种食品本底与对标准差(RSD)为3.8%～72%结果见表3。回收实验均为三平行5次测定,回收率在96.7%～104.6%,相 2.8 干扰实验 2.9 样品溶液的制备 仪器PS3.0极谱仪(卫生部食品卫生监督检验所): 准确吸取样品1.00ml置于