木芙蓉花总黄酮的提取纯化工艺研究.docx

? ? 木芙蓉花总黄酮的提取纯化工艺研究 ? ? 吴远波，焦 涛，吴克勤，刘宇政，张 鸿* (1.江西省医学科学院，江西 南昌 330006；2.丹东市市场监管事务服务中心药检部，辽宁 丹东 118002) 1 引言 木芙蓉花为锦葵科植物木芙蓉Hibiscus mutabilis L.的干燥花，秋季采收，始载于《本草图经》，具有清肺凉血，散热解毒，消肿排脓的功效，用于治疗肺热咳嗽，瘰疬，肠痈，白带；外治痈疖脓肿，脓耳，无名肿毒，烧、烫伤[1]。木芙蓉花富含黄酮类化合物，其中黄酮苷有芦丁，异槲皮苷，金丝桃苷，槲皮素-4’-葡萄糖苷，槲皮黄苷[2]，槲皮素-3-山布双糖苷[3]，花色苷有矢车菊素3，5-二葡萄糖苷，矢车菊素-3-芸香糖苷-5-葡萄糖苷[2]，矢车菊素-3-接骨木二糖苷[4]，黄酮类有槲皮素，山柰酚[5]等。本文对木芙蓉花总黄酮进行提取和纯化的工艺研究，可为木芙蓉花总黄酮的进一步应用提供实验基础。 2 实验部分 2.1 试剂和仪器 2.1.1 仪器 UV-5800型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)；LE24E/02电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，感量：0.1 mg)；EX125ZH电子天平(奥豪斯仪器有限公司，感量：0.01 mg)；RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；DKM610C干燥箱(重庆雅马拓科技有限公司)；DK-98-ⅡA电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。 2.1.2 试剂与样品 试药：芦丁对照品(批号：RFS-L00102003024，含量以98.0%计)，购自成都瑞芬思生物科技有限公司。聚酰胺(目数：30目～60目、60目～100目、100目～200目)，购自台州市路桥四甲生化塑料厂。甲醇、乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。 样品：木芙蓉花采自南昌市，按要求晒干。经丹东市市场监管事务服务中心药检部焦涛主管中药师鉴定为木芙蓉Hibiscus mutabilis L.的干燥花。 2.2 实验过程 2.2.1 总黄酮含量测定[6，7] 2.2.1.1 标准曲线的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.2015 mg的溶液，即得对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL和6 mL至25 mL量瓶中，各加95 %乙醇6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀放置6 min；然后加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀放置6 min，加10%氢氧化钠溶液10 mL，最后加 95%乙醇至刻度，摇匀放置15 min测定。以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法，在510 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程A=12.07c+0.012，r=0.9998，在0.008 mg/mL～0.048 mg/mL范围内线性关系良好。 2.2.1.2 样品的测定 木芙蓉花提取液经适量稀释后，取1.0 mL至25 mL量瓶中，按标准曲线项下自“各加95%乙醇6 mL”起，依法测定吸收度值，并按回归方程计算样品液中总黄酮含量。 2.2.2 木芙蓉花总黄酮提取工艺的研究 2.2.2.1 单因素试验 称取木芙蓉花粉末10 g，共3份，分别以70 %、80 %和90 %的乙醇溶液为提取溶剂，加热回流2次，每次加入提取溶剂100 mL，每次回流2 h，过滤，合并两次滤液，测量总体积。取提取液按“2.2.1.2”项下方法进行总黄酮含量测定。实验结果见表1。由实验结果可知，70 %乙醇作提取溶剂时，所得总黄酮提取量最高，因此，选用70%乙醇作为提取溶剂。 表1 木芙蓉花三种提取溶剂比较 2.2.2.2 提取工艺优化 根据单因素试验结果，以70%乙醇作为提取溶剂，以70%乙醇的用量、提取次数、提取时间为考察因素，每个因素考察3个水平，选用 L9(34)正交试验表安排试验，因素水平见表2。 表2 因素水平表 称取9份木芙蓉花粉末，各10 g，按表3规定的70%乙醇用量、提取次数和回流时间，安排试验，合并各次滤液，测量总体积。所得乙醇提取液按“2.2.1.2”项下方法进行总黄酮含量测定，结果见表3、表4。另外，所得乙醇提取液，各精密量取25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，冷却，称重，计算干膏重量。 表3 正交试验及结果 表4 方差分析结果 直观分析结果表明，各因素对木芙蓉花总黄酮提取量的影响程度依次为BCA，即回流次数回流时间乙醇用量。方差分析结果显示，因素B对总黄酮提取量具有显著影响(P 2.2.3 木芙蓉花总黄酮纯化工艺的研究 经过优选提取工艺，所得的木芙蓉花乙醇提取干膏中总黄酮含量约为18%，为