星点设计-效应面法优化牛心朴子叶多糖提取工艺的研究.docx

? ? 星点设计-效应面法优化牛心朴子叶多糖提取工艺的研究 ? ? ■张 欣 贝盏临 杨海婵 (北方民族大学生物科学与工程学院，宁夏银川750021) 牛心朴子(Cynanchum KomaroviiAl.Iljinski)俗称黑心脖子、老瓜头、芦心草，系萝摩科（Asclepiadaceae）鹅绒藤属（Cynanchum）多年生直立或半直立丛生草本植物。在我国主要集中分布在西北部的宁夏、内蒙等地的沙漠及河边或荒山坡，是喜光、极为耐旱、耐高温的强旱生适阳植物，是土地严重沙质荒漠化的指示植物之一，也是草原逆行演替过程中最后阶段的指示种。牛心朴子其生长条件要求不高，根系发达，耐寒，抗风沙，自我保护能力强，有很强的繁殖能力，在水分较少的干旱地带也能保持较高的吸水和持水能力，在半沙漠化地区显示了抗风固沙的优良特性，是干旱荒漠环境中的优势植种。近些年来随着中草药开发热潮的掀起，牛心朴子作为一种药用植物也开始为人们所知晓，因其茎叶有毒，不能作为一般药剂使用，所以在药用方面受到极大限制，但据很多地方文献记载，牛心朴子可用于镇痛，祛痰医药等方面，藏医用于治疗胆囊炎。现今对牛心朴子研究主要集中在从中分离出一些复杂化合物，如多结构烃类、多种分子结构复杂的生物碱、多糖等。很多种类成分对于医学及其它研究有重大意义，如牛心朴子中提取、精制的多糖对抗S180肉瘤效应初步观察实验中表明牛心朴子多糖有较好的抑瘤作用。这对于现今很多无法医治的肿瘤给予了可能的曙光，而如何能最大程度地提取、获得牛心朴子多糖工艺条件，这将对牛心朴子的资源高效利用尤为重要。 本试验以野生牛心朴子的叶为试材，以乙醇水溶液作为牛心朴子的叶多糖提取溶剂，依据星点设计-效应面法对因素变量（溶剂浓度、超声提取时间、料液比）进行二项式拟合，效应面法分析每个因素的显著性和交互作用来对牛心朴子叶中多糖的提取工艺进行优化，得到最佳的提取条件，为今后对牛心朴子叶多糖的提取提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 1.1.1 试验材料 牛心朴子成熟叶子，于2014年7月采自宁夏盐池县境内毛乌素沙漠边缘（东经107°242.09，北纬37°537.21），标本保存于北方民族大学生物科学系植物标本室。将新鲜牛心朴子叶子，放置于阴凉处阴干，然后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎后过筛（80目）取细粉末，放入干净的密封塑料袋中保藏备用。 1.1.2 试验药品 无水乙醇，分析纯；蒽酮，分析纯；浓硫酸，AR；葡萄糖，标准品；活性炭。 1.1.3 试验器材 烘箱（DHG-9070A，380V/50HZ/140kw，武汉恒泰丰科试验设备有限公司）、微型植物粉碎机（FZ102，220V/180W，郑州博科仪器设备有限公司）、电子分析天平（FA3204B，220V/50HZ，上海天平仪器厂）、超声波清洗器（KQ-500B，500W/200v/40KHZ，昆山市超声仪器有限公司）、单光束紫外/可见分光光度计（UV1000，200V/50HZ/100W，沪）、Millipore纯水/超纯水一体化系统（Di?rect-Q3,5,8）。 1.2 试验方法 1.2.1 样品的制备 精确称取牛心朴子叶细粉末0.3 g，放入150 ml锥形瓶内，加入50%乙醇50 ml，超声提取30 min，活性炭（于25℃水浴中）脱色10 min、过滤，取滤液定容至1 000 ml。 蒽酮-硫酸试液：精密称取蒽酮0.2 g，加100 ml浓硫酸，溶解既得，现用现配使用。 1.2.2 多糖标准曲线的绘制 用UV765紫外-可见分光光度计在390～780 nm范围内进行波谱扫描，检测最大吸收峰波长为620 nm。以葡萄糖（标准品）测定的线性回归方程：y=0.038 4x+0.036 8，相关系数R2=0.999 3。 1.2.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液0.5 ml，按照1.2.2方法，依次显色，测定吸光度，重复测定吸光度6次，计算吸光度相对标准偏差：RSD=1.8%，表明精密度良好。 1.2.4 多糖含量的测定 参考蒽酮-硫酸法，略有改动。 1.2.5 单因素分析 采用超声波、水提-醇沉法提取试验材料中多糖，并选取料液比、乙醇水溶液浓度、超声波浸提时间为影响试验的主要单因素，研究多糖得率。 1.2.5.1 乙醇水溶液浓度对牛心朴子叶多糖提取率的影响 室温（25±1）℃下采用水提-醇沉法提取牛心朴子叶中多糖，其中料液比为1∶15(g/ml）、超声波（功率为200 W）浸提时间为30 min，分别加入50 ml浓度为10%、25%、40%、55%、70%、85%的乙醇水溶液，进行提取。 1.2.5.2 超声波浸提时间对牛心朴子叶多糖提取率的影响 室温（25±1）℃下采用水提-醇沉法提取牛心朴子叶中多糖，其中加入50 ml浓度为5