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中枢神经nogo蛋白的研究进展 成年人由于神经损伤而无法再生。除了与胶质疤痕的空间阻碍作用和促神经生长因子的缺乏以外, 主要是由于中枢神经系统中存在着抑制神经细胞生长的抑制因子。其中, Nogo蛋白作为抑制中枢神经系统再生的最重要的物质, 越来越受到人们的重视。 1 nogo抑制剂—Nogo蛋白及其受体的结构 Nogo是在中枢神经系统髓磷脂中发现的一种抑制轴突生长的蛋白, 编码Nogo蛋白的基因被称为Nogo基因。由于启动子和RNA剪切方式的不同, Nogo基因能够表达出3种m RNA的转录体, 其编码的蛋白质分别为Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C, 长度分别为1163、360、199个氨基酸;这3种蛋白质在近羧基端都有相同的188个氨基酸序列, 且都有2个长度分别为35和36个氨基酸的疏水跨膜区。Nogo分子的氨基端和羧基端都位于细胞浆, 3种Nogo分子的羧基端2个跨膜区之间均存在一个66个氨基酸的结构域Nogo-66, 位于内质网腔或细胞膜外, 是Nogo分子功能区, 可抑制中枢神经细胞轴突生长并能诱导细胞生长锥塌陷。除Nogo-66以外, Nogo蛋白还具有另一具有抑制活性的结构域———amino-Nogo, 重组amino-Nogo片段包括从NogoA氨基端到第一个疏水区的氨基酸序列, 在体外实验中髓鞘的大部分抑制活性可以被针对这一片段的抗体中和。可溶性重组amino-Nogo和Nogo-66蛋白都具有独立的抑制活性, aminoNogo可以抑制神经元细胞和成纤维细胞的生长, 而Nogo-66只能抑制神经元细胞的生长。Nogo基因表达的3种Nogo蛋白中, Nogo-A是Nogo中最主要的形式, 存在于髓鞘的内外环和少突胶质细胞表面, 是突触再生抑制物, Nogo-B是血管重塑调节物, Nogo-C与细胞凋亡有关。 Nogo蛋白发挥作用的受体称为Ng R, 是最近发现并克隆的一种糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 锚定膜蛋白, 它与Nogo-A的细胞外的结构域Nogo-66结合。因Ng R在髓磷脂抑制轴突再生信号转导过程中特殊的靶分子效应, 日益受到重视。Ng R含有473个氨基酸残基, 氨基端有1个信号肽, 其后为8个富含亮氨酸的重复区, 羧基端含丰富的半胱氨酸, 与GPI相连, 并通过GPI连接于细胞表面。但作为一个糖基醇磷脂结合蛋白, 缺乏细胞内片段, 所以其信号向细胞内传导必定要借助其它跨膜分子与Ng R共同作用, 才能将Ng R接受到的来自髓磷脂的抑制信号传递到轴突胞质。 中枢神经系统髓磷脂中另外2种轴突生长抑制性蛋白———MAG与OMgp均通过Ng R及与其相连的受体复合物发挥作用。Nogo-66与MAG结合于Ng R的不同位点, 而Nogo-66与OMgp在Ng R上的结合位点有重叠, 故二者存在竞争。因此Ng R似乎是中枢神经系统髓磷脂中各种轴突生长抑制性蛋白发挥作用的集中点。Ng R在中枢神经系统的多个不同类型的神经元中表达, 其作为配基和信号传递与调节的功能域已经基本明确。 2 nogo-66与nr的相互作用 Nogo蛋白与中枢神经再生的关系一直是国内外科学家关注的热点。目前一致认为, Nogo是中枢神经系统髓鞘磷脂中最重要的一种抑制轴突生长锥再生的蛋白质, 可导致生长锥塌陷并抑制神经元突起的延伸, 亦可被特异性抗体IN-1所识别。实验发现神经元在生长过程中对Nogo基因的表达变化特别敏感, 针对Nogo-A的抗体可抵消CNS髓鞘在体外的抑制活性, 证实Nogo蛋白具有强烈的中枢神经生长抑制活性。Nogo-66仅能特异性抑制神经纤维的生长, 而Nogo氨基片段则作用更为广泛, 可阻断神经纤维生长, 并能抑制非神经细胞的伸展和迁移。 Nogo-66与Ng R的特异性结合抑制CNS的再生, Nogo-A通过多位点的相互作用激活Ng R启动神经细胞内的信号转导通路抑制轴突再生和结构的重塑性。Nogo-A与Ng R可能通过以下3种方式结合:一是完整少突胶质表面的Nogo-66直接与损伤神经元的Ng R结合, 简称细胞-细胞方式;二是从受损少突胶质脱落下来的含Nogo-66的膜片段与损伤神经元的Ng R结合, 称为细胞-膜方式;还有一种是完全溶解的少突胶质释放Nogo-A的N端和Nogo-66的可溶性蛋白水解片段, 与其受体结合, 其抑制作用更强。此外, Nogo-A还可通过下调轴突生长相关基因发挥抑制神经生长的作用, 但此抑制作用的胞内信号转导机制目前尚不清楚。另外, Nogo-B和Nogo-C是否存在抑制作用还有争议。 3 信号转导功能 由于Ng R没有跨膜区及细胞内结构, 其接收的信号需要通过其它跨膜分子传递。近来有证据表明p75即具有这一作用, p75细胞外结构域能与全长Ng R结合, MAG-F