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补脾益气中药对哮喘发病机制的影响 在气管哮喘（哮喘）期间，身体微细胞因子网络发生障碍可能是原因之一。了解各种细胞因子、炎症介质的功能及其相互关系,是研究哮喘气道炎症机制的关键。本研究拟观察哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-5(IL-5)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)含量变化,探讨其在哮喘发病中的协同作用,同时观察中药加味玉屏风散对它们的影响,为探索中药治疗哮喘的理论基础提供客观依据。 1 材料和方法 1.1 不同剂量的hs 雄性Wistar大鼠24只,体重160～250 g,按随机数字表法分成正常对照组、哮喘模型组和加味玉屏风散组,每组8只。在实验1、3和5 d向大鼠腹腔注射抗原液1 ml(含卵白蛋白100 mg,灭活百日咳杆菌疫苗5×109个,氢氧化铝干粉100 mg)致敏;正常对照组则用等量生理盐水代替抗原液;加味玉屏风散组给予加味玉屏风散(黄芪、白术、防风、冬虫夏草等)制成的纯浓度药液,每日2 ml胃饲。2周后哮喘模型组用超声雾化器向自制体描箱内喷雾质量分数为1%的卵白蛋白激发,每日08:00～09:00吸入20 min,隔日激发1次,共3次;正常对照组则用生理盐水代替抗原液以同样方法激发和记录。7 d后按设计取材,所有大鼠均进行呼吸曲线描记及肺组织病理学检查。 1.2 il-5、gm-csf、tnf-和sil-2r的含量测定 腹腔注射质量分数为1.5%的戊巴比妥钠(3 ml/kg)麻醉后,开胸行气管插管,向气管肺组织内注入生理盐水10 ml,反复抽吸3次,将抽取的BALF放入离心管中,1 000 r/min(离心半径10 cm)离心10 min,取上清液用于检测IL-5、GM-CSF、TNF-α和sIL-2R的含量。IL-5测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(美国Endoger公司产品),按照说明书操作。GM-CSF测定采用ELISA试剂盒(第四军医大学产品),按说明书操作。sIL-2R测定采用ELISA试剂盒(美国Genzyme公司产品),按说明书操作。TNF-α测定采用ELISA试剂盒(解放军军事医学科学院产品),按说明书操作。 1.3 统计处理 结果以均数±标准差(ˉx±s)(xˉ±s)表示,采用t检验,各指标间进行相关分析,P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 细胞、上皮细胞所占比例 哮喘模型组大鼠BALF中总细胞数、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞(EOS)、上皮细胞所占的比例均远远高于正常对照组(P均0.01),尤其以EOS升高更为显著。加味玉屏风散组BALF中细胞总数及分类细胞均较哮喘模型组显著降低(P均0.01)。 2.2 gm-csf与il-5、tnf- 哮喘模型组大鼠BALF中IL-5、GM-CSF、TNF-α和sIL-2R含量均较正常对照组显著增加(P0.05或P0.01),其中IL-5增加更显著。GM-CSF与IL-5(r=0.519,P0.05)和TNF-α(r=0.521,P0.05)之间均呈显著正相关。加味玉屏风散组BALF中IL-5、GM-CSF、TNF-α和sIL-2R含量较哮喘模型组均显著降低(P0.05或P0.01)。 3 讨论 3.1 th2细胞th3对有关感冒的细胞因子的作用 IL-5是一种主要由活化的T细胞和肥大细胞产生的糖蛋白,在亚剂量的IL-4存在下,对IL-4诱导的免疫球蛋白E(IgE)合成有显著的协同效应。GM-CSF-酸性糖蛋白造血因子可单独诱导粒细胞、单核细胞等的增长与终末分化。二者在EOS的产生、聚积和活化方面有协同作用,尤其是IL-5对EOS有选择性作用。刘贵云等研究发现,中药制剂治喘贴能促进发作期哮喘患儿EOS凋亡和降低IL-5含量。 有T细胞Th2样表型的细胞因子对EOS迁移和功能有强有力的作用,尤其是IL-5,故有学者提出Th2样T细胞在哮喘中可调节EOS的流入与活化。当向人气道内注射重组的IL-5后,BALF中EOS与嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)水平均显著升高,提示IL-5在哮喘发病中占重要地位。Th2细胞所产生的IL-5能增强EOS对血管内皮细胞的黏附能力,并对EOS具有强烈的趋化性,还可促使EOS分化及释放炎症介质。激活的T细胞和EOS存在于过敏性或非过敏性哮喘患者,提示T细胞和EOS的相互制约对不同来源哮喘的发生可能是重要的,在这一过程中,IL-5可能起核心介导作用。 3.2 gm-csfmrna的表达 有报道表明,过敏性鼻炎患者经变应原激发后,BALF中GM-CSF样活性物质水平显著升高,并与BALF中EOS计数明显相关;进一步研究表明,位于哮喘患者非特异性炎症局部的EOS可表达GM-CSF mRNA;G