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下丘脑室旁核对大鼠心血管反应的影响 大脑室侧核（pvn）是调节心脏活动的重要脑区域之一。这些神经元与干部的自治中心相连，可以直接控制交感神经的前神经。近年来国内外学者对于PVN在心血管活动中的调节作用备加注意。电刺激PVN可引起明显的升压反应或降压反应,但该心血管反应的中间途径和机制尚不清楚。杏仁核是边缘系统的主要核团之一,它参与机体的多种活动。大量的研究工作已经证明,杏仁核与血液循环、体液调节等内脏活动密切相关。中央杏仁核(CeA)是杏仁核的一个亚核,也是调节心血管活动的的重要核团之一。业已证明,CeA与PVN有直接纤维联系,提示两者在功能上有相关之处。考虑到CeA与心血管活动的密切关系,本研究进一步探讨了PVN-CeA这条神经通路在PVN心血管反应中的作用。本工作旨在探讨PVN兴奋所致的心血管效应,以及CeA在PVN兴奋诱发的心血管反应中的地位。 1 实验方法和分组 1.1实验动物及一般处理 健康雄性SD大鼠,体重250~350 g,由本校实验动物中心提供。用20%乌拉坦腹腔麻醉(1.0~1.2 g/kg),自主呼吸。大鼠置于恒温手术台,肛温维持在38℃左右。一侧股动脉插管,连接MacLab实验记录系统记录股动脉血压、平均动脉压曲线,同时记录心电图(Ⅱ导联)、心率曲线。 1.2立体定位及电刺激 用江湾I型C立体定位仪固定鼠头,按Paxinos and Watson 图谱,将绝缘不锈钢双极电极(外套管直径0.45 mm,电极尖端直径0.09 mm,上下相距0.4~0.5 mm,浸于生理盐水时,电极尖端电阻为24 kΩ)插入待刺激核团。PVN的电刺激参数为0.1~0.3 mA,80 Hz,波宽0.5 ms,持续10 s。定位参数:PVN(P 1.7~1.8 mm,LR 0.4~0.5 mm,H 7.8~8.0 mm),CeA(P 1.8~2.0 mm,LR 3.7~3.9 mm,H 7.8~8.2 mm)。 1.3脑内微量注射 脑内注射采用3管玻璃微电极,利用管内充满的液体石蜡油传导压力进行微量注射,并利用三通来控制开关注射的玻璃微电极。电极尖端直径约50 μm。实验时3管微电极内分别为L-谷氨酸钠(L-Sodium Glutamate,L-Glu)、下列药品之一、5%膀胺天兰,CeA注射药物容积为100 nl。注射用药:L-Glu(0.5 mol/L,pH 7.0),由第二军医大学政翔医用科技实业服务部化学试剂研究室提供;红藻氨酸(Kainic acid,KA,0.02 mol/L),Sigma公司产品。所有药品于实验前用生理盐水溶解成所需浓度,在30 s内注完,用相同剂量的生理盐水作对照。 1.4定位与组织学检查 实验结束后,刺激电极通以100 μA直流电20 s,微量注射部位注入5%的膀胺天兰400 nl。从大鼠左心室先后用生理盐水、1%亚铁氰化钾—福尔马林生理盐水灌流后,断头固定于10%甲醛溶液中,一周后取出鼠脑,置于20%蔗糖甲醛溶液中,24 h后作冰冻切片(厚50 μm)。切片用中性红染色。根据图谱在显微镜下鉴定刺激点和微量注射点(图1)位置,定位不准确者不列入统计。 1.5实验分组 本实验采用随机分组法把大鼠分为以下4组:组1:观察电刺激PVN的心血管效应(n=8)。组2:观察PVN微量注射L-Glu 的心血管效应(n=6)。组3:同侧杏仁微量注射生理盐水,观察电刺激PVN的心血管效应(n=6)。组4:同侧杏仁微量注射KA后,观察电刺激PVN的心血管效应(n=7)。 1.6统计方法 大鼠血压用平均动脉压(MAP)表示,MAP数值由计算机处理得到。升压反应以刺激后的MAP减去刺激前的MAP(ΔMAP)表示。各组数据用xˉ±sxˉ±s来表示,以t检验作统计学处理。 2 结果 2.1 pvn治疗高血压 本实验中所有SD大鼠的基础血压为(100.95±2.48)mmHg,心率为(403±5.98)次/min。8只大鼠电刺激(电刺激参数为0.1~0.3 mA,80 Hz,波宽0.5 ms,持续10 s)一侧PVN均引起血压升高,动脉血压平均升高了(22.88±2.18)mmHg,升压效应约持续10~30 s。停止刺激数秒后,血压恢复(图2)。电刺激PVN引起的心率变化不一,差异很大,故以下分析以血压变化为主。另在6只大鼠一侧PVN微量注射L-Glu 100 nl后,平均动脉压升高了(20.33±5.25)mmHg,持续时间较电刺激PVN的升压效应长,约5~30 min。心率变化以增加为主(4只)。也有2只大鼠心率分别下降约10与14次/min。 2.2 同侧cea微量注射wsb内压药pahss-pcr 7只大鼠刺激一侧PVN后升压(20.35±2.25)mmHg。待作用消失后,同侧CeA微量注射L-Glu 100 nl,