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心肌缺血再灌注损伤模型的研究进展 目前，冠状动脉内结石是急性心脏病患者公认的有效治疗方法。然而，由于冠状动脉内结石中存在再注入损伤，重新注入损伤的研究和预防已成为研究的重点。Jennings等于1960年针对组织细胞低灌流缺血后获得血液再供应时, 组织细胞缺血性损害未得以减轻或恢复, 缺血性损伤反而加重的病理变化首次提出了心肌缺血再灌注损伤 (MIRI) 的概念。目前心肌梗死的临床治疗手段已由传统的药物治疗逐渐上升到基因治疗、细胞治疗等方法, 但任何方法在临床应用前都要经过动物实验研究。近些年, MIRI模型已经成为抗MIRI临床前研究的重要手段, 是指导临床应用、复杂新药开发的重要研究方法。但是在MIRI造模过程的实践中, 存在较多难以把握的关键技术, 能否成功建立MIRI模型已成为值得关注的问题。 1 建立miri模型 1.1实验动物的确定MIRI模型旨在通过结扎左冠状动脉前降支, 造成急性心肌缺血, 并在预定时间内予以再灌注, 已成为模拟人类缺血性心脏病恢复血供必需的实验方法。现代研究中, 用于建立MIRI模型的常用实验动物有:猪、犬、兔、羊、小鼠及大鼠等。实验动物的选择依照接近人体病理生理的原则, 选择进化关系上接近人类的大鼠, 其基因背景清楚、繁殖周期短、冠状动脉侧支循环少、心肌坏死出现早、模型重复率高, 结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死是目前国内外公认的模型制备方法。在实验过程中, 建立MIRI模型应选择为鼠龄9~11周, 体质量为220~280 g的大鼠。 1.2麻醉处理随着麻醉技术的飞速发展, 采用现代麻醉药物传递系统理念, 结合传统麻醉药物的施药特点、动物的反应, 摒除毒性作用较大的乌拉坦和麻醉诱导时间较长的水合氯醛, 采用戊巴比妥钠进行麻醉, 其麻醉诱导时间短, 对心脏毒性小, 且大鼠术后苏醒快, 剂量易掌握。在麻醉过程中, 应注意下面几点:1) 麻醉药现用现配, 防止日久变质。2) 实验大鼠均严格称质量, 精确计算麻醉药量, 3%的戊巴比妥钠腹腔注射剂量1.5 m L/kg。3) 麻醉药尽量一次性注射到实验大鼠的腹腔内, 避免中途补药造成死亡, 若因种种原因未将麻醉药注射完全, 应改用其他待做大鼠麻醉。4) 在麻醉剂给予过程中, 基础给药量确定后, 应根据动物对麻醉药的反应, 适时对给药量进行微调。5) 实验中加用1%的普鲁卡因进行局部麻醉, 可有效减轻大鼠的疼痛反应, 降低麻醉药的使用量, 降低呼吸抑制作用。6) 麻醉期间, 使用37℃的电热毯进行保温。 2 重呼吸道的粘结 2.1 开胸方式 曾有研究在实验过程中将肋骨剪断, 扩大手术视野, 对大鼠造成较大损伤, 极易引起心律失常致死。在实验过程中, 在麻醉后背位固定大鼠, 首先用手触摸其心尖搏动处, 确定心脏在胸腔中的大体位置。沿胸骨左缘心脏搏动处纵向剪开皮肤2~3 cm, 用止血钳逐层分离皮下肌肉, 暴露左第3、4肋。再用16 cm弯头止血钳迅速沿胸骨左缘3、4肋间隙插入胸腔分开肋骨, 将心脏轻柔迅速的挤出胸腔, 挂线结扎, 结果显示成功率较高, 改良方法重视细节上对模型制备的操作, 明确指出手术时视野、心脏固定的难易程度、大鼠胸腔的正常结构等方面的关键性问题, 综合控制大鼠在开胸过程中的情况, 保证模型制作的成功率。在实验中应注意以下几个状况:1) 在大鼠开胸前, 应仔细剪除大鼠胸部毛发, 清理后可使用生理盐水或碘伏将皮肤擦干净, 避免开胸后毛发贴在心脏表面与神经、血管混淆, 影响结扎操作。2) 若出现胸腔粘连, 用手术剪轻轻将心包膜撕裂后再将心脏挤出胸腔, 然后按照上面步骤进行操作。3) 若出现体质量过重或者过轻以及罕见的右位心现象, 在术前超声过程中进行标记, 便于找到正确的位置进行开胸。4) 实验总结发现, 应注重机体病理状态, 摒弃外援呼吸系统, 每隔2~5 min用棉签清理口腔至呼吸道中的分泌物, 防止大鼠窒息死亡。 2.2 结扎过程的关键性问题 2.2.1结扎操作结扎前于心脏大静脉处放1根实心玻璃丝引线 (1.5~2.0 mm) , 石蜡油润滑后, 用6/0无创缝合针于左心耳根部下方2 mm处穿过心肌表层, 在肺动脉圆锥旁出针, 进针深度为0.5~1.0 mm、宽度为2.0~3.0 mm, 此时稍微轻轻用力拉起缝合线两端, 心尖的左室前壁失去原有光泽而显暗灰色或青紫色, 左室收缩活动减弱及此过程动态心电图中出现ST段弓背向上持续抬高和R波增高的现象, 初步判断缝合线牵拉住左冠状动脉前降支, 结扎位置准确。若出现因局部刺激导致心肌苍白, 之后很快恢复正常的现象, 或者未见到ST段弓背向上持续抬高和R波增高的情况, 则表明结扎未成功, 立即轻轻抽出缝合线, 重新按照以上步骤进行再次结扎操作。在结扎过程中注意以下几点:1) 进针位置:尽