不同产地连钱草药材的高效毛细管电泳指纹图谱研究.docxVIP

不同产地连钱草药材的高效毛细管电泳指纹图谱研究 连草是嘴唇科植物的活血丹（glechoma）kpor干燥的土壤。具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能。主治尿路结石、疳积、黄疸、感冒、肺痈、咳嗽、小儿惊风、跌打扭伤、骨折、风湿性关节炎等疾病。湖北省民间常用新鲜连钱草治疗腹泻,疗效较好,其抗腹泻作用机理近年来已得到初步研究。我国连钱草资源极为丰富,除西北和内蒙古外,全国各地均有分布。据报道,测定连钱草中熊果酸和总黄酮的质量分数可控制该药材质量。但这种测定单一成分和有效成分质量分数的方法并不能全面反映连钱草药材的内在质量,因为中药的药效往往是多成分协同作用的结果。 中药指纹图谱不强调中药单一指标的绝对唯一性,而强调中药多成分、多指标的整体性及中药内在质量的均一性和稳定性,是现阶段可以全面反映中药内在质量的一个有效手段。 本文采用高效毛细管电泳(HPCE) 建立了连钱草药材的指纹图谱,对4个产地及对照药材的指纹图谱进行了比较分析,为连钱草药材的质量评估提供了一定科学依据。 1 药品、化学品、乙酰氨基酚对照品 CAPEL-105 型毛细管电泳仪(LUMEX,俄罗斯),配有可调波长的UV检测器和ChromSpec 1.5X数据处理系统;pH计(上海雷磁公司)。 连钱草对照药材(中国药品生物制品检定所,批号121386-200401);对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定所);乙醇、乙腈及硼酸(分析纯);湖北咸宁和四川产连钱草购于湖北省医药有限公司,湖北武汉和湖北恩施产连钱草自行采集,经湖北中医学院中药鉴定教研室鉴定为唇形科植物活血丹(Glechoma longituba(Nakai)Kupr.)的干燥地上部分。 2 方法和结果 2.1 连钱草供试溶液的配制 内标溶液的配制 精密称取对乙酰氨基酚0.0756 g,用乙醇溶解并定容至50 mL,摇匀,得10 mmol·L-1的内标溶液。 供试溶液的配制 精密称取干燥的连钱草粉末5 g,加入体积分数75%乙醇50 mL,加热回流30 min,趁热过滤。重复提取2次。合并滤液,减压浓缩,加入内标溶液0.5 mL,并用体积分数75%乙醇定容至50 mL,经0.45 μm微孔滤膜过滤,得供试溶液。其中,内标物浓度为0.1 mol·L-1。 2.2 测试方法 未涂层融熔石英毛细管50 μm I.D.×375 μm O.D.,总长62 cm,有效长度53.5 cm(河北永年锐沣色谱器件有限公司);检测波长278 nm;压力进样3 kPa,15 s;电压25 kV;毛细管温度25℃;电泳缓冲液:50 mmol·L-1硼酸缓冲液 ( pH 9.2),并含有体积分数15%乙腈。毛细管使用前分别以0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液、重蒸馏水和电泳缓冲液依次冲洗10 min、10 min、15 min,每2次电泳之间用电泳缓冲液冲洗5 min。 2.3 指纹谱的构建 2.3.1 贸易投资电泳结果 按“2.1”项下方法制备不同产地连钱草药材的供试溶液,每个产地进样2次,记录电泳图,共考察了60 min,发现在20 min后没有电泳峰出现。比较4个产地和对照药材供试溶液的电泳结果,以电泳峰的相对迁移时间 (电泳峰与对乙酰氨基酚内标物迁移时间的比值) 定性,确定共有指纹峰为16个 (见图1)。不同产地连钱草药材共有峰的相对迁移时间和相对峰面积 (共有峰与内标物峰面积的比值) 见表1。 2.3.2 指纹图谱检测 取一份湖北咸宁产连钱草供试溶液,分别在0, 1, 2, 6, 8, 12 h检测指纹图谱。以共有峰的相对迁移时间计算,RSD小于2.6%;以共有峰的相对峰面积计算,4号峰的RSD为6.4%,14号峰的RSD为5.6%,其余共有峰的RSD均小于5% 。说明供试溶液在12 h内基本稳定。 2.3.3 共有峰相对峰面积和相对峰同时点的rsd 取一份湖北咸宁产连钱草供试溶液,连续进样5次,各共有峰相对迁移时间的RSD小于2.6%,相对峰面积的RSD除4号峰为5.4%外,其余共有峰的RSD小于 5% 。说明方法的精密度较好。 2.3.4 目标迁移时间和相对峰面积的rsd 精密称取干燥的湖北咸宁产连钱草药材粉末5份,每份5.0 g,按“2.1”项下制备供试溶液,测定其指纹图谱,各共有峰相对迁移时间的RSD小于2.3%,相对峰面积的RSD除4号峰、14号峰分别为7.2%、6.1%外,其余共有峰的RSD小于5%。说明方法的重现性较好。 2.3.5 测定样品峰重叠率 指纹图谱及其峰重叠率 5种连钱草药材的指纹图谱见图1和表1。 峰重叠率是在2个相互比较样品的各自峰数及两者共有峰数的基础上,从质的角度考察2个样品的相关性。即:重叠率 = [待测样品与对照样品共有峰数 × 2 /(待测样品峰数 + 对照样品峰数)] × 100%