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白组培技术研究进展 b.f.狼型是一种多年生草本植物，也被称为白及、连和草和甘根。分布在中国和韩国，分布在中国和韩国。它位于中国东部、华南、河南、陕西、四川、云南以及其他地方。白及块是中国传统的中药。《神农本草经》中有记载。在《中国药典》中，记载了具有益肺、肿胀、肌肉、止血、止血等功效。用于治疗肺损伤、伤口、伤口、溃疡、疼痛、唐菖蒲伤口、手脚撕裂等疾病。此外，白的颜色也是一种非常鲜艳的景观植物。因此，市场对白的需求非常高。由于市场需求的扩大，近年来中国大部分地区的野生白非常采集和挖掘，野生自然资源急剧下降、灭绝。为了保护白的野生资源，需要手动繁殖和种植白。由于种子小，没有多少种子，自然条件下很难发芽和生长，也很难种植幼苗。传统的栽培主要依靠根系繁殖，但根系繁殖周期长，繁殖效率低，种植量大，难以满足许多栽培的需要。组织培养技术可以快速繁殖大量幼苗，比根系繁殖更快速、更高效。近年来，中国科学家开始探索白组织繁殖技术，为白栽培提供水源，实现人工栽培，取消对野生资源的依赖。本文总结了近年来中国白组的培训和相关研究，为今后的研究提供了参考。 1 培训白鹿组的方法 根据选用的外植体不同,白芨组织培养的途径主要分为2类. 1.1 种子萌发和组培 白芨种子虽然没有胚乳,但郭顺星和徐锦堂的研究表明,白芨胚的薄壁细胞贮存大量的蛋白质、油脂和碳水化合物,可作为种子萌发的营养成分,因此白芨种子在保湿的情况下可以萌发,是兰科植物中种子易萌发的类型.故此,目前大部分白芨组织培养研究的外植体都选用种子,采用Bemard创立的非共生萌发法,将种子播撒在培养基上进行无菌萌发. 种子萌发后所采用的组培程序则各有不同.有的作者采用“原球茎→诱导原球茎增殖→诱导芽的分化→诱导生根”的组织培养程序,增殖主要利用诱导原球茎增殖完成,继代培养也采用原球茎;有的作者采用“原球茎→诱导丛生芽增殖→诱导芽的分化及生根”的组织培养程序,继代培养使用丛生芽;有的则直接采用“原球茎→诱导芽的分化→诱导生根”的组织培养程序;还有的作者采用原球茎直接“生长分化→诱导生根”的程序.这些组培方法都能取得扩繁的效果,但扩繁效果有一定差别. 白芨的蒴果中有大量的种子,并且蒴果的消毒较方便,污染率低.另一方面用种子作为外植体操作较容易,并且组培过程中萌发率高,培养的幼苗生长较为迅速,因此,种子作为外植体应用比较广泛,大部分的组培研究都选用种子. 1.2 白作为外植体的诱导植株 植物的分生组织也可用来进行组织培养.1960年,Morel采用大花蕙兰的茎尖进行组织培养,成功地获得了无病毒植株.近年也有一些作者探索利用白芨的块茎、侧芽、茎尖或根作为外植体的组培体系.何俊蓉等用白芨新鲜块茎的顶芽、余朝秀等用茎尖及侧芽、石云平等用侧芽和块茎、韦卡娅等用块茎,以及田英翠和袁雄强用白芨的幼根,都获得了白芨的组培苗.组织培养的过程一般都是由诱导丛生芽和诱导生根2个步骤构成. 韦卡娅等同时进行了2种组织培养途径的对比实验,结果表明利用幼嫩块茎作为外植体诱导丛生芽60d才有小芽形成,且分化效率不高;而用种子作为外植体,30d就开始萌动,60d小苗就分化完全.由于所需时间长、分化效率低,因此用块茎、侧芽等作为外植体的方法目前远不如种子萌发方法普遍. 2 种子萌发相关因素的基本过程和影响 2.1 种子的无菌播种 2.1.1 果皮萌发率 张建霞、付志惠等对不同成熟度种子萌发的研究表明,胚从授粉到成熟一般需要4~5个月,随着白芨胚龄增大,胚成熟度不断增加,有胚率和萌发率逐渐提高,种子萌发时间逐渐变短.20周后采收的蒴果有胚率最高,萌发率为100%,萌发时间只需1 周;3~4个月胚龄的种子萌发率也都比较高,萌发期较短,适宜作为组织培养种子,在野外则一般在每年的9~10月蒴果由淡黄到褐色成熟之际采集比较合适. 若采集的白芨种子不能及时进行培养研究,也可用塑料袋密封保存于5℃的冰箱中.赵仁全等的研究表明5 ℃条件下对种子贮藏最为有利,贮藏60d 后种子萌发率才开始缓慢下降,贮藏5 个月时种子萌发率仍达50 %左右,而冷冻和常温条件均不利于白芨鲜蒴果的保存. 2.1.2 种子处理和接种 白芨蒴果的消毒过程比较简单,一般取未开裂的蒴果用洗衣粉或肥皂洗净,于超净工作台上用70%的乙醇浸泡30s,再用0.15%升汞浸泡8~10min,无菌水冲洗3~4遍后置于灭菌的吸水纸上,吸干水分待用.对于已开裂的果实可先用75%的乙醇灭菌后,取出种子,用白细布包裹,置于10%次氯酸钠中浸泡5~10min,取出再用无菌水冲洗3~4次,即可用于无菌播种[4,13,14,15,16,18,21]. 2.1.3 种子萌发和前茎诱导 在外植体消过毒以后即可将其接种到培养基中进行种子萌发.种子萌发过程中基本培养基、激素及添加剂都起到了重要的作用. (1) /2m