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铁皮石斛组培快繁技术研究 石斛是中国传统的稀有中药。它分为绿叶铁、黄草、金针、霍山、环草、马鞭等几十个品种。其中，铁皮石斛（又名剥皮枫斗）是最珍贵的。他是“中国九仙草”的第一人，也是石斛中的瑰宝。古语云:“北有人参, 南有枫斗”, 民间也有“救命仙草”、“中华仙草”、“药中黄金”之美称。主产于我国云南、贵州、浙江、四川、广西、安徽等地, 多生长于高温多湿的热带、亚热带高山峻岭、悬崖峭壁及岩石缝隙之间, 是一种生长缓慢、自身繁殖能力很低的兰科附生植物, 且十分娇嫩, 遇强光、直射光或暴雨、雪冻即会死亡, 水分过多也会使其根部腐烂, 甚至整株死亡。由于铁皮石斛具有巨大的药用价值, 导致了长期无节制的采摘, 致使资源濒临枯竭。1987年国家已将铁皮石斛列为重点保护野生珍稀药材品种, 国家第一批《中国珍稀濒危保护植物名录》也将其列入其中。为了更好地保护铁皮石斛野生资源, 变野生为家种, 应大力发展规模化人工栽培, 切实保障铁皮石斛资源的可持续利用。从20世纪70年代起, 国内外有关机构便开始了铁皮石斛的研发工作, 尤其在铁皮石斛的组织培养与快速繁殖技术、人工栽培技术方面进行了大量研究, 现就这方面的研究进展作一综述, 以期为进一步开发利用铁皮石斛资源提供依据。 1 皮石斛在种子移栽中的应用 利用组织培养技术繁殖试管苗是解决铁皮石斛种苗的有效途径, 关于铁皮石斛试管苗移栽成功的报道也日渐增多。目前, 铁皮石斛用于外植体的主要有种子、无菌苗幼苗茎段、原球茎及人工种子等。据研究, 由种子诱导的愈伤组织分化能力较强, 由种胚培养的原球茎的质量也较高。 2 铁皮石斛种子萌发 目前再生植株获得的途径主要有:种子→原球茎→小植株;种子→原球茎→无菌苗茎段→小植株;种子→原球茎→愈伤组织→丛芽→生根苗;种子→愈伤组织→原球茎→小植株;原球茎→人工种子→幼苗;茎尖→愈伤组织→丛芽→生根苗等。 铁皮石斛种子自然成熟约需230d, 3个月以上胚龄的种胚在无菌播种下的萌发率一般在90%以上, 成熟的种子在KS、SH、VW、PTV、MS、改良的N6、1/2MS及RM多种基本培养基上均可萌发生长。添加一定浓度的NAA、6-BA或NAA+6-BA组合, 可提高种子的萌发率;而加入2, 4-D, 胚萌发率显著低于对照组;附加0.5mg/L KT或IAA, 萌发率与对照组相近;加入不同植物提取液, 如椰子汁、香蕉汁、马铃薯汁和豆芽汁, 均可使种子的萌发率达90%以上, 而加入蕃茄汁仅有65%。 3 激素对铁皮石斛原球茎增殖的影响 在植物组织培养中, 试管苗的增殖很关键, 通过原球茎诱导产生丛生芽, 再将丛生芽培养成丛生小苗, 从而达到快速扩大种苗繁殖的目的。铁皮石斛的原球茎呈松散桑椹状, 其数量和质量对于增殖培养极为重要, 原球茎发育成丛生芽时, 如果没有适合的培养基, 就会影响到苗的形态建成及试管苗的质量, 产生畸形苗, 影响试管苗的扩繁。在铁皮石斛原球茎增殖和分化的过程中, 培养基中激素浓度配比是一个非常关键的因素。蒋波等对铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗的研究表明:在6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L和6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L中原球茎的增殖系数较大, 而在6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L中, 丛生芽的形态建成较好, 说明激素浓度偏高或偏低均不利于铁皮石斛原球茎的生长和分化。根据试验结果, 应将激素浓度控制在6-BA 2.0~3.0mg/L、NAA 0.2~0.5mg/L范围之内, 而且在试验结果相差不大的情况下, 最好选择低浓度激素组合, 以免过度扰乱植物体内的激素水平, 造成细胞变异, 产生畸形苗。 张治国等报道, 原球茎增殖的适宜条件为1/2MS培养基+3%蔗糖+0.8%琼脂, 25℃, 光照;原球茎分化的适宜条件为1/2MS培养基+2%蔗糖+20%马铃薯提取液+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA, 25℃, 光照。蒋林等报道, 适量活性炭和1.0mg/L NAA比较适合铁皮石斛原球茎的增殖;1/2MS添加0.5mg/L NAA和0.5%活性炭比较适宜原球茎的分化;添加0.5%活性炭和香蕉汁、苹果汁能促进试管苗生根和生长。适宜的培养条件对铁皮石斛组织培养和快速繁殖至关重要, 活性炭能使原球茎的增殖量显著增加, 这可能是活性炭吸附了某种不利于原球茎增殖的物质, 使根系长得粗壮, 芽苗生长良好;苹果汁对原球茎的增殖有较好的效果, 且能促进原球茎的分化, 使根系长得粗壮;马铃薯汁能促进原球茎的分化, 但对芽苗的生长有抑制作用;香蕉汁对原球茎的增殖有抑制作用, 但对原球茎的分化无抑制作用, 这可能是由于香蕉中含有某种不利于原球茎增殖的物质, 但香蕉汁能使根系长得粗壮;适当浓度的NAA对原球茎的增殖、分