甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对小鼠实验性肝损伤的保护作用.docxVIP

甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对小鼠实验性肝损伤的保护作用 甘肃生产的绿鹭艾属植物的五脉绿鹭艾，主要分布在甘南高原、祁山、中部高原和马鞭山。这是欧洲埋酒花的传说，与30多种西藏药物一起混合使用。它又甜又涩，很冷。具有清热解毒、止痛利尿等功效。临床应用于肝炎、肺炎、肝肺热和水肿的治疗。本课题组前期研究显示甘肃产藏药五脉绿绒蒿及其总黄酮具有明显的镇痛抗炎、体外抗氧化等作用;本次研究分别设计了甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对四氯化碳(CCl4)、硫代乙酰胺(TAA)及扑热息痛(AP)诱发小鼠急性肝损伤模型的影响,探讨甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮的保肝作用及其作用机制,为临床用药提供理论依据。 1 材料表面 1.1 实验试剂和试剂 甘肃产藏药五脉绿绒蒿(Meconopsis quintuplinervia Regel)全草购自甘肃省合作市藏医院,经甘肃省定西市临洮农校卢通宁高级讲师鉴定。四氯化碳(CCl4),广东汕头市西陇化工厂生产,批硫代乙酰胺(TAA),天津市大茂化学试剂厂生产,批扑热息痛(AP),上海化学试剂公司,批丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒,均为南京建成生物工程研究所提供。其余试剂均为分析纯。 1.2 仪器 1.3 实验动物,4.1 昆明种小鼠,SPF级,雌雄兼用,体质量(20±2)g,由甘肃中医学院实验动物中心提供,实验动物许可证号SCXK(甘)2011-0001。 2 方法 2.1 五脉绿绒蒿总黄酮乳剂的制备 称取甘肃产藏药五脉绿绒蒿全草粗粉适量,用95%乙醇回流提取,减压回收乙醇后用石油醚萃取脂溶性较强的杂质,残留物用1 mol·L-1HCl溶液溶解,调pH2~3,过滤,残留物即为黄酮类粗品。将上述黄酮粗品用1 mol·L-1NaOH溶液溶解,调pH至9~10,过滤,碱水层再用1 mol·L-1HCl溶液调pH至2~3,用乙酸乙酯萃取数次,合并乙酸乙酯,减压浓缩即得五脉绿绒蒿总黄酮。精密称取上述五脉绿绒蒿总黄酮适量置研钵中,定量加入聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温-80),采用干胶法按“油∶胶∶水2∶1∶2”的比例制备初乳,适当稀释即得五脉绿绒蒿总黄酮乳剂;另取适量吐温-80制备0.5%的溶液作为对照液,冷藏备用。 2.2 肝脏生化指标的测定 取小鼠55只,按性别体重随机分为5组,各给药组动物ig甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮(0.300,0.150,0.075 g·kg-1)20 m L·kg-1,每日1次,正常对照组和模型对照组ig等量对照液,连续7 d。末次给药1 h后,模型对照组及各给药组ip 0.15%CCl4花生油溶液10 mL·kg-1(15 mg·kg-1),正常对照组ip等量花生油。禁食(不禁水)16 h后,称重,眼眶采血,取血清测定ALT,AST;脱颈椎处死小鼠,取出完整肝脏,称重,计算肝脏指数;取肝组织适量制成10%匀浆液,按试剂盒说明书测定肝组织SOD活性及MDA含量。 2.3 血清alt,ast活性测定 取小鼠55只,按2.2项下方法分组、给药。末次给药1 h后,模型对照组及各给药组ip 5%TAA溶液10mL·kg-1(500 mg·kg-1),正常对照组ip等量蒸馏水。禁食(不禁水)16 h后,眼眶采血,测定血清ALT,AST活性;脱颈椎处死小鼠,取新鲜肝脏组织制成10%匀浆液,按试剂盒说明书测定肝组织GSH-Px活性。 2.4 血清alt,ast活性测定 取小鼠55只,按2.2项下方法分组、给药。末次给药1 h后,模型对照组及各给药组ip 1.5%AP溶液10mL·kg-1(150 mg·kg-1),正常对照组ip等量蒸馏水。禁食(不禁水)16 h后,眼眶采血,测定血清ALT,AST活性;脱颈椎处死小鼠,取新鲜肝脏组织制成10%匀浆液,按试剂盒说明书测定肝组织MDA的含量。 2.5 处理数据 实验数据以的形式表示,组间比较采用单因素方差分析,应用SPSS 11.5统计软件进行统计学处理,P0.05有统计学意义。 3 结果 3.1 ccl4致小鼠急性肝损伤模型复制 与正常对照组比较,模型对照组血清ALT与AST含量、肝脏指数以及肝组织MDA的含量明显升高,肝组织SOD的活性明显降低(P0.01),显示CCl4致小鼠急性肝损伤模型复制成功;与模型对照组比较,甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮各剂量组对实验各项指标有不同程度的改善作用且显示出一定的量-效关系。见表1。 3.2 提高肝组织gsh-px活性 TAA引起小鼠ALT,AST,GSH-Px明显变化(P0.01);甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮能明显减低血清ALT与AST的水平,提高肝组织GSH-P