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复方酮康唑乳膏的安全性评价 氨基溶胶的主要成分是咪唑，是第二代抗真菌药物。这是一种高效、光谱的抗真菌药物。它可以抑制真菌膜的麦角醇生物合成，影响膜的渗透性，抑制其生长。其对皮肤癣菌如毛发癣菌属、表皮癣菌属、小孢子菌属及酵母菌如念珠菌等具有抑制作用,可用于手癣、足癣、体癣、股癣、花斑癣及皮肤念珠菌病。酮康唑口服剂型虽在胃酸内溶解易吸收。但吸收后分布广泛,血药浓度波动较大,会带来许多如恶心、呕吐、腹痛、头痛等不良反应,偶有肝损害及过敏反应。近年来根据临床给药途径与现代制药方法制成了乳膏剂、洗剂、搽剂、滴耳剂、喷膜剂等酮康唑的外用剂型。多种剂型减轻了酮康唑的不良反应,扩大了临床用药范围,带来了给药的灵活性。乳膏剂为皮肤科最常用的剂型,酮康唑加入乳膏基质中,可充分发挥其在皮肤表面的抑菌作用,并具有润滑、保护皮肤的作用。本实验根据《新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》提供的方法进行复方酮康唑乳膏的家兔皮肤刺激性实验及白色豚鼠皮肤过敏性实验。通过观察家兔完整及破损皮肤多次涂敷复方酮康唑乳膏后的皮肤刺激反应和豚鼠皮肤重复涂敷复方酮康唑乳膏后机体免疫系统在皮肤上的表现情况,评价该制剂的安全性,为其临床应用提供参考依据。 1 实验材料 1.1 致敏剂、仪器和仪器 复方酮康唑乳膏、复方酮康唑乳膏基质,江西源生狼和生物科技有限公司试制,批号规格15g/支;碘伏,购自江西草珊瑚消毒用品有限公司,批号致敏剂2,4-二硝基氯苯(临用时用芝麻油配制成l%的致敏浓度和0.1%的激发浓度),天津市光复精细化工研究所,批号电子天平,福州华志科学仪器有限公司;剪毛剪,5号针头,绷带等。 1.2 实验动物科技普通 健康家兔8只,体重1.8~2.2kg,雌雄各半;健康豚鼠30只,体重250~300g,雌雄各半,均购自长沙市开福区东创实验动物科技服务部,许可证号:SCXK(湘)2009-0012。实验期间将动物置于恒温、恒湿空调实验室分笼喂养,自由进食、饮水、适应环境3天后方可进行实验。 2 实验方法 2.1 4-酮苯基醇乳膏的皮肤刺激性试验 2.1.1 皮肤主动保护的测试 8只健康家兔按体重、性别随机分为两组,即完整皮肤和破损皮肤组,每组4只。于给药前24h将各组家兔背部脊柱两侧用剪毛剪对称去毛,去毛面积左右各5cm×5cm。破损皮肤组脱毛部位先用碘伏消毒,再用无菌针头划“﹟”字,以轻度渗血为度。实验采用同体左右侧自身对照法,将受试物按0.5g/只均匀涂布于各组家兔一侧已去毛的皮肤上,再用一层玻璃纸或类似物覆盖,再用无刺激性胶布和绷带加以固定,单笼饲养。另一侧涂布同样剂量的乳膏基质作对照。涂药后贴敷时间至少4h。贴敷结束后,除去受试物并用温水清洁给药部位。每天同一方法,同一时间给药1次,持续给药7d。 2.1.2 皮肤主动贴实验 实验期间于自然光线下观察皮肤反应。在每次去除受试物后1h以及再次涂敷前观察及记录皮肤红斑和水肿、涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况及其发生时间和消退时间。末次贴敷后,在去除受试物后1h、24h、48h和72h肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。按表1给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分;按表2进行皮肤刺激性强度评价。 2.2 单尾醇醇乳膏皮肤过敏实验 2.2.1 给药、给药与造模 将30只豚鼠按体重、性别随机分为3组,每组10只。第1组为给药组,给复方酮康唑乳膏0.2g;第2组空白对照组,给空白基质0.2g;第3组为阳性对照组,给1%2,4一二硝基氯苯0.2mL。给药前24h将各组豚鼠背部脊柱两侧用剪毛剪对称去毛,去毛面积左右各3cm×3cm。给药前修剪受试部位残存毛发,在各组动物左侧去毛区分别涂以相应受试物致敏。为确保受试药物与皮肤接触达到有效停留时间,给药后以一层玻璃纸和两层纱布覆盖,再用无刺激性胶布封闭、固定,持续6h,第7天和第14天以同样方法重复给药1次。第28天激发给药,用上述同样方法将相应受试物(阳性对照组改用0.1%2,4-二硝基氯苯激发)分别涂在各组动物背部右侧脱毛区,同法覆盖、固定6h。贴敷结束后,除去受试物并用温水清洁给药部位。 2.2.2 皮肤主动光催化酶活性评价 实验期间于自然光线下观察皮肤反应。除去受试物后即刻和第24h、48h、7h观察和记录局部皮肤红斑、水肿情况。按表4对皮肤红斑和水肿进行评分并统计反应平均值和致敏率;按表5的致敏性评价标准判断致敏性。同时密切观察动物是否出现有哮喘、站立不稳或休克等严重全身过敏反应。 3 从大鼠皮肤和破损皮肤主动因素看 实验结果:家兔完整皮肤和破损皮肤接触相同剂量的复方酮康唑乳膏和基质后不同时间,动物均未见局部红斑和水肿及色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情