谷氨酸转运体抑制大鼠癫痫模型的构建及其对突触可电性的影响.docxVIP

谷氨酸转运体抑制大鼠癫痫模型的构建及其对突触可电性的影响 癫痫是中枢神经系统中一个特定的神经退行性神经退行性疾病，通常伴随着初始神经退行性疾病，通常伴随着攻击时的学习和记忆障碍。谷氨酸是中枢神经系统中重要的刺激性神经运动神经传输的一部分。在生理上，它可以参与神经冲动的传导并调节你的效率。病理条件下，血管生成的谷氨酸释放也起着癫痫的作用。氨基糖转移体（aet）是硝基和皮质膜的糖蛋白。目前，有5种明确的谷氨酸转移体（glast-ait1、glt-1、aea2、aec1、aet4、aet5）。在生理状态下，谷氨酸转移体清除细胞外的谷氨酸，并维持接触之间的正常信号传输。在某些病理条件（如na）下，这些变化不仅可以改变表面成绩，而且还会导致神经毒性谷氨酸的释放。谷氨酸和谷氨酸的转移体共同影响细胞外的谷氨酸水平，以及神经细胞的生化。星形糖细胞的巨大变化和苔藓纤维的发芽。这些变化在癫痫的发病机制和发展过程中发挥着重要作用。对于攻击和癫痫的过渡阶段，ga3和racematga1、ga3和ga3方面的gademat-1以及gat-1内囊泡内的反应性星形质细胞的大小和颗粒的大小可以观察到谷氨酸转移体的变化。对于ca3和斜坡上的斜坡上的gaanwinch，以及gat-1内囊泡内的gaggal和意义改善。这些变化可以被认为是对大量细胞失去的一种等价机制，以防止进一步的细胞损失。在潜伏期，不同叶回头颗粒和分子层的gaanwinch出现改善，但gaanwinch的长期影响，尤其是对自发攻击后水位和动作电位的影响，在本实验中，采用了钛-鲁卡色癫痫模型，探讨了钠转体对癫痫状态下的影响，以及长期突变适应性的影响。 1 材料和方法 1.1 大鼠癫痫模型的建立 本实验采用雄性Wistar大鼠, 体重 (304.06±13.79) g (275～330 g) , 由军事医学科学院提供.建模前20 h给予Li Cl2, 皮下注射匹鲁卡品 (Pilocarpine, Pilo, 25 mg/kg, Sigma, USA) 诱导癫痫发作.建模前30 min给予硫酸阿托品 (1 mg/kg, i.p.) , 对抗匹鲁卡品的外周胆碱能作用.癫痫发作持续30 min以上视为建模成功, 发作60 min后给予安定 (10 mg/kg, i.p.) 终止发作减少死亡率. Wistar大鼠32只随机分为5组:短期癫痫实验组 (SE) 及其对照组 (SC) , 长期癫痫实验组 (LE) 及其对照组 (LC) , 健康大鼠对照组 (Sham) , 大鼠建模14天后, 30%乌拉坦 (4 ml/kg.i.p.) 麻醉, 手术暴露颅骨, 立体定向引导在SE和LE组大鼠的右侧海马内 (前囟后3.1 mm, 右侧2.5 mm, 深4.0 mm) 缓慢匀速注射 (5 min) 谷氨酸转运体抑制剂TBOA (7.5 nmol/1μl, Sigma, USA) , 及在SC和LC组大鼠的相同部位注射相同剂量人工脑脊液, 留针15 min. 1.2 脑立体定位图谱 大鼠给予TBOA 2 h (SE和SC组) 及14天后 (LE和LC组) , 30%乌拉坦 (1.2 g/kg) 麻醉, 固定于头部立体定位仪 (Narishige, Japan) , 检测右侧海马内嗅区前穿通纤维 (PP) 和海马齿状回 (DG) 之间长时程增强 (LTP) 并记录右侧DG区EEG.依据Paxinos和Watson大鼠脑立体定位图谱 (1986年) , 记录LTP时, 置于PP的刺激电极为前囟后8.0 mm, 中线旁4.4 mm, 置于DG的记录电极位于前囟后4.2 mm, 中线旁2.5 mm.用比较接近生理变化的theta频率刺激 (theta burst stimulation, TBS) 诱导出LTP (Power Lab, Australian) .记录电极和刺激电极均缓慢插入, 直到选一固定强度而能记录出最大群体峰电位 (population spike, PS) 的部位, 调整刺激强度至记录的电位反应稳定增加20%后, 记录15 min低频 (0.1 Hz, 波宽0.1 ms) 诱导的反应作为基础值, 再给予高频刺激 (10个4 Hz的串刺激, 每个串刺激有4个频率为100 Hz的单脉冲, TBS重复5次, 每次间隔20 s) 诱导长时程增强 (LTP) .记录并保存刺激前15 min至刺激后1 h的反应, 分析兴奋性突触后电位 (EPSP) 的斜率和PS的波宽.LTP记录后, 记录DG区的EEG. 1.3 神经元变性观察 电生理实验结束后大鼠经心脏灌流取脑, 固定、脱水、包埋、石蜡切片 (Leica, Germany) , 然后作特异性标记神经元变性的荧光染色, 即Fluoro-Jade-B染色, 观察海马区