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d-半乳糖衰老模型抗衰老组穴配伍规律研究 随着蒙古族医学、针灸和莫哈布西翁的发展，多穴药物法的研究已成为未来的发展趋势。该课题近3年来,在探索灸疗法组穴原理、筛选有效抗衰老单穴的基础上,以顶会穴、胃穴、火衰穴、肾穴为切入点,通过施灸单穴抗衰老作用研究以及二穴、三穴组穴实验研究,探讨蒙医灸疗法抗衰老组穴配伍规律,旨在为多穴组穴配伍规律研究奠定基础,推动和促进蒙医灸疗法抗衰老研究。 一、 材料和方法 1. 材料表面 120只纯种7个月龄Wistar大鼠,体重为270±20g、雄雌各半,合格证号:SCXK(蒙)2002-0001。 (2) 它的设备 UV-1601型分光光度计、固定热水盒、AE160型电子分析天平、高速冷冻离心机、4～20℃和-80℃冰箱、水迷宫、游泳盒 (3) 试剂与试剂盒 D-半乳糖(南京建成生物研究中心,批号、血清超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物研究中心,批号、过氧化氢酶(CAT)试剂盒(南京建成生物研究中心,批号、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物研究中心,批号、艾灸由北京中医药大学提供,直径3mm,长lcm、灸垫厚度0.5mm。 2. 方法 (1) 大鼠的组合方法见表3 将120只Wistar大鼠按体重随机分成12组。分别为正常对照组、模型对照组、二穴组(按C42组合方法组穴为:顶会与胃穴组、顶会与火衰穴组、顶会与肾穴组、胃穴与火衰穴组、胃穴与肾穴组、肾穴与火衰穴组)和三穴组(按C43组合方法组穴为:顶会穴、胃穴、火衰穴组;顶会穴、胃穴、肾穴组;胃穴、火衰穴、肾穴组;顶会穴、火衰穴、肾穴组)。造模前将大鼠雄雌分开,在干净舒适环境中饲养。每天将更换颗粒饲料饮用水和窝垫。实验第6周开始分别对所进饲料和水量进行记录。 (2) 大鼠体重和造模时间 除正常对照组外均用D-半乳糖按每天150mg·kg-1的比例颈背部皮下注射,正常对照组注射同剂量生理盐水。在造摸期间每周称一次大鼠体重,并观察大鼠运动举止和皮毛的颜色等外部特征。造模时间为6周。出现大鼠皮毛颜色变黄脱落,眼光变呆,动作缓慢,出现无精打采、驼背、怕冷,体重增加不明显等外部特征,与文献报道一致,即造模成功。 (3) 大鼠穴位施药 从第7周开始施灸,其中对正常对照组和模型对照组只给固定条件,不做任何处理。对灸疗组参照文献在大鼠顶会穴(头颅正中间)、胃穴(在大鼠第12脊椎下凹处)、肾穴(在大鼠第14脊椎下凹处)、火衰穴(在脐上10mm处)剪去穴位周围鼠毛,二穴、三穴进行施灸。合计时间为15min,7天为一疗程,隔一天施灸一次(每次行3艾拄),共施灸3个疗程。 (4) 实验大鼠的基本情况 灸疗结束前一周进行该试验,用于大鼠的学习记忆能力的检验,实验前进行培训。迷宫由塑料板制成的,深度为22cm,水温度为24±1℃,分终点、A、B、C等4区,终点区将设有大鼠的上岸台,在做认识练习前,先将大鼠放在岸台附近,让大鼠自己上岸台两次,其后分3个阶段进行训练。第1阶段:封住A区的一端让大鼠从A区游到终点;第2阶段:训练大鼠从B区游到终点;第3阶段:训练大鼠从C区游到终点。每阶段进行3次训练。每次训练后休息5min。整个训练过程结束后休息2h并开始检测。实验时将记录大鼠从C区到达终点安全岸台时所用的时间和在迷宫中出错次数,5min中内如果不出去的按5min记录。从而检测大鼠的学习技能,24h后再进行检查评定大鼠的记忆能力。 3. 抗氧化酶活性测定 采用断头取血方法,将新取出的血放入高速离心机,按3500rpm的速度离心15min后提取血清。超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法测定,丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法测定,过氧化氢酶(CAT)含量采用比色法测定。之后取脾脏和胸腺,用生理盐水洗干净后进行称重。计算出脾(胸腺)指数公式为:脾(胸腺)指数=脾(胸腺)重量(mg)/体重(g)。 4. 统计方法 数据统计采用spss17.0软件处理。数据以平均值±标准差表示,各组之间比较用Q检验。 二、 结果 1. 不同药养动物模型大鼠体重增加量 正常对照组与模型对照组比较,体重有明显差异(P0.01),表明造模后模型对照组体重增长变缓慢,结果见表1。 造模后各灸疗组与模型组大鼠体重比较,各灸疗组大鼠体重增加比模型组快(P0.05),说明造模成功后模型组大鼠体重增长受限,见表2。除此之外,我们还观察到,模型大鼠动作比正常对照组变迟缓,毛色枯黄,精神萎靡不振等外部特征。 2. 顶会穴、火衰穴、肾穴配伍对顶会穴活性的影响 模型对照与组正常对照组比较,SOD活性活性明显下降(P0.01),二穴组中的顶会穴与火衰穴配伍组和三穴组中的顶会穴、火衰穴、肾穴配伍组与模型组比较,SOD活性无明显差异