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胞吐的分子机制 异基因（异基因）是指在真核细胞中，含有物质的膜袋泡与物质膜融合，并将其从细胞外排出的过程。一般有组成型(constitutive pathway)和调节型(regulated pathway)两种途径。前者见于所有的真核细胞的膜结构,如质膜的正常更新,此时运输小泡(transport vesicle)持续不断地从高尔基网形成,到达质膜后立即进行胞吐;此过程不需外部信号的触发。除这一途径外,很多细胞(如内分泌细胞、外分泌细胞、肥大细胞、血小板及神经元等)还具有调节型途径:分泌囊泡(secretory vesicle)成群地聚集在质膜下,只有在外部信号触发质膜产生胞内信使后才和质膜融合发生胞吐。胞内信使如何触发胞吐目前尚不清楚,而且触发因子随细胞类型而异。如在神经元和卵细胞,[Ca2+]i的升高足以触发胞吐;而在肥大细胞,Ca2+则仅是胞吐的辅助因子。另外,不同细胞的融合机制不同。 胞吐的分子机制是近几年研究的热点,但与胞吐有关的关键分子至今尚未确定。本文拟就和神经分泌有关的三个方面的进展作一介绍。 一、 胞吐和表型的缺失 有些研究表明,调节型胞吐的激活和以肌动蛋白为基础的末梢细胞骨架的快速重组有关。这提示胞吐可能是由融合屏障的撤除而被触发的。融合屏障可为分泌囊泡和质膜间的细胞骨架蛋白凝胶网。除肌动蛋白外,基质蛋白可随细胞而异。 (一) tkisynapsin蛋白表达动力学 synapsins是指存在于SSVs膜上的一族外周磷蛋白,可能是使SSVs彼此之间及与细胞骨架交联。现已知道这个家族包含四个成员:synapsinⅠa、Ⅰb及Ⅱa、Ⅱb。Ⅰa和Ⅰb是同一基因的不同加工产物。对synapsins的生化及功能性质的了解大多来自对synapsinⅠ的研究,已知它至少包含四种不同蛋白激酶的磷酸化位点。利用快速冰冻蚀刻技术,Hirokawo等(1990)已确定了突触前活性区(active zone)的构筑模型:囊泡之间及与肌动蛋白网之间似乎是通过30nm粗的短链分子相连的;肌动蛋白网则通过fodrin和活性区相联。该短链分子在外表及大小上与synapsinⅠ很相似,提示synapsin尾部和囊泡结合,而头部和肌动蛋白或另一synapsin的头部结合,从而使小泡相互交联。这种交联将囊泡固定在释放位点附近。钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CM kinaseⅡ)对synapsinⅠ的磷酸化可能降低囊泡与肌动蛋白的结合,从而使囊泡挣脱细胞骨架网而到达活性区进行胞吐。由于递质释放是一个非常快的过程,所以,这一机制似乎不参与递质释放的直接控制,但也许在为下次刺激准备可能胞吐的囊泡上有重要作用。 将synapsinⅠ或Ca2+/CM kinaseⅡ注入乌贼大纤维轴突的实验支持这一假说,即synapsinⅠ的磷酸化状态参与递质释放的调节。 (二) 嗜铬细胞的calpacin和磷酸化 嗜铬细胞质膜下有高度有序的细胞骨架网,包括肌动蛋白、fodrin、caldesmon及纽蛋白(vinculin),可能作为胞吐屏障。受刺激后[Ca2+]i的升高将导致嗜铬颗粒从该网挣脱,到达质膜胞吐位点进行胞吐。有几个钙结合蛋白与此有关,其中最重要的可能是calpactin。它属于annexins家族,由两条重链(36kD)及两条轻链(10kD)组成,在进化上保守。在完整的嗜铬细胞中,它位于质膜和嗜铬颗粒的胞质面,细胞受刺激胞吐时,它可被磷酸化。体外实验表明,它可促进花生四烯酸对膜的融合。可通透的(参见下文)嗜铬细胞由于胞吐所需组分的泄漏,分泌水平降低,但可被calpactin或其轻链(p36)恢复;而这一效应又可被p36抗体阻断(Ali等.1989)。另外,calpactin引起嗜铬颗粒聚集所需的钙浓度最接近生理水平,所以,calpactin或p36可能是嗜铬细胞胞吐时的钙受体并参与胞吐的触发。 二、 免疫活性化合物的变化 许多细胞的胞吐过程涉及G蛋白。对可通透细胞(permeabilized cell,即利用去垢剂或成孔毒素等在细胞膜上造成大小不同的孔,从而可向胞内导入特定的离子、核苷酸等)胞吐调节因子的研究提示,可能有一种新的G蛋白参与胞吐过程。已知肥大细胞在受IgE刺激后释放组胺是通过磷脂酶C(PLC)-第二信使系统实现的。经链球菌溶血素-O (streptolysin-O,SL-O)处理的可通透肥大细胞,供给Ca2+(μmol/L)及GTP(μmol/L)后,可使组胺(100D)释放。但是,用新霉素(neomycin)将PLC完全抑制后,供给GTP及Ca2+仍可使组胺释放。这一结果提示,在胞吐中至少有两步涉及GTP:(1)由和受体偶联的G蛋白(GP)激活PLC,从而使4,5-二磷酸酯酰肌醇(PIP2)水解成1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)