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家蚕病原性微孢子虫的ssurrna序列分析 微藻昆虫是一个特殊的细胞内寄生虫，没有颗粒。它属于五段分类系统的原生生物边界和微壳昆虫门。现已发现的微孢子虫种类超过1 000多种,分属2个纲,4个目,30个科,85个属,另有6个科、32个属未确定分类地位。微孢子虫能感染寄生脊椎动物和无脊椎动物,是许多经济昆虫、鱼类、兔类、皮毛动物、啮齿类及灵长类的致命病原。 因微孢子虫被认为是与生物进化有关的最原始的真核生物而倍受关注,因此微孢子虫的系统发育和进化成为争论的焦点。微孢子虫的形态、结构特征和一些分子系统发育树等均支持微孢子虫是第一个从真核生物中分化出来的观点。最近分子生物学研究从分子水平捕捉到了微孢子虫具有的一些“高级痕迹”,如:其5S RNA为典型的真核生物型,发现了线粒体“残留物”—HSP70的编码基因,EF-1α基因中含有的插入序列为动物和真菌所特有,α和β微管蛋白与真菌的也极为相似等。因而认为微孢子虫从真核生物中分化出来并不早于真核生物与线粒体的共生关系形成之前,它可能是从真菌或真菌的类似物中分化而来,提出了微孢子虫更接近真菌的学术观点。 早在1965年Zuckerandl就认为生物大分子的序列是进化的记录,可用探讨物种间亲缘关系。在生物大分子中,蛋白质、核酸已用于进化研究,由于SSUrRNA普遍存在于真核生物和原核生物的核糖体中,其一级结构种系的保守性表现在所有种系中,比编码蛋白质的基因保守100倍以上,且碱基长度适中,碱基变化的积累以一种类似计时器的方式进行,因此,SSUrRAN在生物进化和系统演化研究中是一个良好的分子指标,已被广泛应用于生物系统发育和进化研究上。为了了解家蚕病原性微孢子虫Endoreticulatus bombycis的进化地位,本文利用GENETOOL、TREECON软件包和GenBank中登录的微孢子虫SSUrRNA序列构建微孢子虫的进化树,对家蚕病原性微孢子虫Endoreticulatus bombycis的进化地位进行分析。 1 数据和方法 1.1 urrna序列和ssurrna序列 微孢子虫的SSUrRNA序列包括:本研究室克隆的家蚕病原性微孢子虫Endoretiulatus bombycis的SSUrRNA序列(GenBank中的记录号为gAY009115)和GenBank中已登录的其他微孢子虫的SSUrRNA序列,分属微孢子虫门的2个纲,4个目,18个科,26个属和2个未确定分类地位的微孢子虫;模式属种的微孢子虫SSUrRNA序列共27个,分属2个纲,4个目,18个科,26个属,包含了微孢子虫门的全部2个纲、4个目和2/3的科。 1.2 微芽孢虫的进化 微孢子虫的进化分析软件。选用GENETOOL、TREECON(1.3 b)软件包进行微孢子虫的进化分析。利用GENETOOL和TREECON软件包,分别以3种不同的进化距离估算模型和原核生物、真核生物为外群构建微孢子虫门的进化树,并进行微孢子虫门的进化分析。 2 微培养虫门聚类特征 利用GENETOOL和TREECON软件包构建了微孢子虫门的进化树,包括:微孢子虫门的2个纲,4个目,18个科,26个属的27种微孢子虫;以及2种真菌,毛滴虫,双滴虫(Giardia lamblia)等真核生物;还包括1种古细菌,6种细菌等原核生物。并分别以古细菌、细菌和真菌作外群,以3种进化距离估算模型构建了微孢子虫门的进化树。由于不同外群构建的进化树相似,故于此只列出以古细菌作外群,用JukesCantor进化距离估算模型所构建的进化树(图1)。 以古细菌、细菌和真菌作外群,以不同进化距离估算模型构建的微孢子虫门进化树的结果相同。进化树显示出原核生物和真核生物各聚为一大类群。微孢子虫门聚类成4大类群:第一类群由双单倍期纲中的少双单倍期目、离异双单倍期目组成;第二类群由双单倍期纲中的少双单倍期目、离异双单倍期目组成,该类群分为2个亚群;第三类群由双单倍期纲中的少双单倍期目、离异双单倍期目和单倍期纲中格留目组成;第四类群由双单倍期纲中的少双单倍期目、离异双单倍期目和单倍期纲中格留目、Chytridiopsida目组成,该类群分为2个亚群。在真核生物中,缺乏线粒体营独立生活的双滴目(Diplomonadida)首先从原核生物中分离出来,接着是毛滴目(Tritrichomonadida),然后是微孢子虫和真菌。微孢子虫的4大类群中,双单倍期纲中少双单倍期目起源最早,特别是双单倍期纲中的Parathelohnia anophelis;单倍期纲中格留目进化程度最高,特别是其中的Vavraia culicis和Trachipleistophora hominis。家蚕病原性微孢子虫Endoreticulatus bombycis位于第三类群中,处于