AgNPs的绿色合成及其对杨树组培苗生长的影响.docxVIP

? ? AgNPs的绿色合成及其对杨树组培苗生长的影响 ? ? 王大成，苏鹏飞，贾会领，丁双双，黄胜威，阚文杰，姚缘圆，侯金艳，吴丽芳,4* (1.安徽大学 物质科学与信息技术研究院，安徽 合肥 230039；2.中国科学院合肥物质科学研究院 离子束生物工程与绿色农业研究中心，安徽 合肥 230031；3.中国科学技术大学 生命科学学院，安徽 合肥 230031；4.中科太和试验站，安徽 太和 236626) 纳米银(silver nanoparticles，简称AgNPs)作为一种独特的纳米材料，由于其优异的光电、催化及抗菌等性能，被广泛应用于传感器[1]、电极元件[2]、催化剂[3]、生物材料[4]及医疗抗菌[5]等领域.因此，人们开始关注AgNPs的合成.传统的物理和化学方法合成AgNPs存在反应时间长、反应步骤繁琐以及反应过程中存在有毒试剂的使用等缺陷[6].植物提取液合成AgNPs存在反应液制备过程复杂[7]、反应效率低等问题[8].由于通过微生物还原法即生物合成法合成AgNPs具有操作简单、反应条件温和、成本低廉以及绿色环保等优点，被认为是AgNPs生产最具前景的来源[9].此外，利用生物合成方法合成的纳米粒子表面很容易附着蛋白等生物基质，在提高生物溶解性的同时提高了AgNPs的稳定性，使其在生物医学领域更具应用潜力[10]. 目前，已分离出多种用于AgNPs合成的菌类[11-13]，由于细菌繁殖迅速而在AgNPs合成中脱颖而出[14].但AgNPs合成中亟需筛选1株硝酸银耐受性强且合成效率高的菌株.笔者实验室前期在松褐天牛肠道内筛选到1株奇异变形杆菌(Proteusmirabilis) YC801，研究发现此株奇异变形杆菌能够高效合成纳米硒[15]，并初步证实该菌株具有高效合成AgNPs的能力.由于细菌胞外滤液相比于全细胞而言无细胞结构等，用于合成AgNPs不仅操作简单、易于分离，且具有较高的回收效率和产量等优势. 目前，AgNPs作为植物生长调节剂在植物快繁方面表现出越来越多的积极作用，Manh等[16]研究发现1.6 mg·mL-1AgNPs可显著提高越南参体细胞胚的发生和增殖，Spinoso-Castillo等[17]研究表明,在香兰草的组培快繁中，低剂量AgNPs的使用既能抑制微生物污染又能通过提高叶绿素含量、总酚含量,抵抗氧化及脂质过氧化能力来促进幼苗生长.此外，AgNPs在草莓组培快繁体系中能显著提高芽增殖率和不定根诱导率[18].目前，AgNPs对植物生长的研究主要集中在AgNPs对植物抗氧化酶系统的影响[19]及抑制乙烯通路[20]等方面，而在光合作用方面鲜有报道.众所周知，光合作用是植物生命活动中一项重要的生理生态过程，植物生物量的积累离不开光合作用.叶绿素作为植物光合色素中一类重要色素，其含量高低以及最大光化学效率Fv/Fm的大小可作为评判植物光合能力强弱的重要指标[21]. 杨树(PopulusL.)作为我国重要的材用树种，在绿化及防风固沙方面也具有重要作用.通过组培方式对其进行快繁，在杨树种苗规模化推广及遗传改良方面起着举足轻重的作用.目前，有关AgNPs对杨树组培苗生长影响方面的研究尚未有报道.笔者以奇异变形杆菌YC801合成AgNPs为主要研究内容，探究菌培养时间、银离子浓度、反应温度、反应时间，以及pH等对菌液上清合成AgNPs的影响.在AgNPs合成的基础上，进一步研究AgNPs对杨树组培苗不定根形成、光合能力等的影响. 1 材料和方法 1.1 供试材料 菌株：所用菌株奇异变形杆菌(Proteusmirabilis) YC801为笔者实验室保藏(NCBI注册号为MK701741).所用培养基为YEP固体培养基和YEP液体培养基. 杨树组培苗：以笔者课题组前期离体再生培养获得的长势均一的无性系84K杨树组培伸长不定芽为实验材料.所用基本培养基为1/2 MS固体培养基(6.8 g·L-1琼脂、20 g·L-1蔗糖培养基皆用1 N NaOH或1 N HCl将pH调整至5.8，于121 ℃，105 kPa条件下高压蒸汽灭菌20 min后，备用). 1.2 主要试剂和仪器 硝酸银(AgNO3)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；吲哚丁酸(IBA), 美国Sigma Aldrich；超微量生化分光光度计(Scandrop)，德国Analytik Jena AG；扫描电子显微镜(S4800), 日本日立；电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES, ICP 7400), 美国 Thermo Scientific；叶绿素计(SPAD-502 PLUS), 日本柯尼卡美能达；手持式光谱仪(SpectraPen LM 510)、手持式叶绿素荧光仪(Fluorpe FP