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美洲黑杨次生韧皮部筛管发育过程中超微结构的动态变化 植物细胞的过程是植物生长发育过程中不可或缺的一部分。自然细胞死亡的特定阶段对植物的形态和组织的形成具有重要意义。迄今为止,已在衰老的植物叶片与花瓣,败育的雌雄生殖器官,解体的胚乳细胞、助细胞、绒毡层细胞及珠心细胞,分化的导管细胞等各种类型植物细胞中发现细胞程序性死亡的现象。与动物细胞的程序性死亡不同,植物细胞的程序性死亡产物既可以被其他细胞吸收和利用,也可以用于构建自身的细胞壁。吴鸿等研究拟南芥(Arabidopsis thaliana)根原生韧皮部筛管细胞分化过程,在电镜下观察到核解体超微结构变化的特征,认为核的变化是一种典型的细胞程序性死亡现象。Eleftheriou等发现在植物茎和叶的韧皮部中,如果原生韧皮部筛管细胞的周围缺少伴胞,则筛管的寿命较短,反之筛管的寿命较长。后期大量的研究资料证实初生韧皮部筛管和伴胞之间是密不可分的功能复合体,譬如伴胞与筛管之间存在大量的胞间连丝,成熟的筛管细胞中一般无核糖核蛋白体,细胞内蛋白质的合成依赖于伴胞细胞等等。众所周知,筛管是一类无核的细胞,寿命一般只维持几个月,后期出现功能衰退直至死亡,在此过程中伴胞作为筛管功能的支持维护结构。但有关次生韧皮部筛管/伴胞复合体功能衰退过程中细胞结构的变化及其与筛管功能相关性的研究资料较少,笔者以林木研究的模式树种杨树为实验材料,在超微结构水平上研究植物次生韧皮部筛管/伴胞复合体结构与功能的变化过程,旨在为植物发育生物学提供基础资料。 1 材料和方法 实验材料与电镜样品制作方法参见文献。 2 结果与分析 2.1 筛管母红细胞的分离纯化 观察美洲黑杨茎的横切面,可见来源于维管形成层的韧皮部母细胞内液泡分布在细胞腔的一侧,细胞核和细胞质偏向细胞另一侧角隅处,在角隅处发生核分裂,筛管母细胞核分裂后在靠近筛管母细胞角隅处产生成膜体,成膜体之间有大量成膜体微管出现(图1-1,1-2),成膜体相互融合后形成细胞板,并进一步形成细胞壁,最终形成了大小不同的两个细胞。较大的一个细胞内细胞质相对稀少,内有中央大液泡,小的细胞内液泡体积较小,并在较长的一段时间内维持这一状态。另外,大小细胞间的壁较薄,具有丰富的胞间连丝,其余部分的细胞壁相对较厚,早期可根据这些特征识别筛管分子和伴胞(图1-3)。 2.2 游离核糖体的降解 在筛管分子发育成熟及其功能衰退过程中,筛管分子的细胞结构和细胞组分发生了明显变化,笔者将次生韧皮部筛管分子的分化分为未成熟期、成熟期和衰退期。未成熟期定为筛管分子液泡膜破裂之前筛管分子的发育阶段,在这一时期内出现了细胞的径向扩展、壁增厚及筛管质体和P-蛋白质产生等现象 (图1-4)。成熟期是筛管分子的细胞组分发生选择性自溶,形成成熟筛管分子的阶段,以液胞膜的裂解作为开始的标志。成熟期筛管分子内的细胞质迅速降解,多聚核糖体降解成游离核糖体并逐渐消失,高尔基体扁平囊的结构不清晰,内质网裂解呈短片状(图2-1)。在筛管分子发育成熟过程中,质体上沉积的物质逐渐增多,最后发育形成S型的筛管质体(图2-3)。与此同时筛管细胞核也以两种方式开始降解:(1)染色质出现凝聚现象,核质电子密度较低,局部出现空白区域,核膜清晰,细胞核周围出现大量的管状P-蛋白质,发育后期的筛管-细胞核内物质的电子透明度更高,说明核物质几乎完全降解,核外仍然存在大量的管状P-蛋白质,此时核膜依然非常清晰(图2-1);(2)核降解的时间较迟,核膜模糊不清,核质呈弥散状,这种弥散状的核质与细胞质内由P-蛋白质构成的电子致密物相连,似乎没有清晰的界限(图2-2)。成熟的次生韧皮部筛管分子的原生质组分分布在细胞腔的边缘,主要是由质膜、线粒体和筛管质体及少量的光滑内质网等组成,在筛管分子细胞腔内还有P-蛋白质构成的丝状网格结构出现,这些连结成丝状的P-蛋白质,通过筛穿孔连接相邻的两个筛管分子(图2-3)。次生韧皮部筛管分子衰退过程的开始以质膜解体作为标志。质膜内折,收缩裂解;质体的被膜解体,筛管质体裂解释放淀粉粒分散于筛管分子腔内(图2-4)。随后筛管分子内的P-蛋白质也解体,筛板上出现胼胝质垫的结构 (图3-1)。线粒体是筛管分子内最迟降解的细胞器(图3-1),在筛管分子内的细胞质完全降解消失后,筛板处的胼胝质发生自溶现象,最后形成具开放筛孔的筛板,至此筛管完全失去功能(图3-2)。 2.3 衰退期筛管分子伴胞形态结构的变化 伴胞与筛管分子由同一个筛管母细胞分裂分化而来(图1-1,1-2),在筛管分子分化期间一直保持着代谢旺盛状态,细胞质较浓,细胞器尤其是线粒体非常丰富,在细胞质中大量存在。伴胞和筛管分子之间的壁上存在大量胞间连丝,在筛管成熟期一直维持这一状态(图2-3)。筛管细胞衰退期伴胞形态结构发生了一系列的变化,图3-3 显示的是衰退期筛管