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注射用氧化型谷胱甘肽二钠有关物质的hplc法测定 氧化二甲苯乙二钠注射液由pharmabam生产，主要用于治疗小细胞肺癌和化疗。现在它只在俄罗斯上市，并在美国进行了临床试验。氧化二甲苯乙二钠注射液是我们研究所的研究人员开发的三种药物，规格为20mg/片，批号为200876-1。hplc法有效分离和检测制剂中的物质和含量。 1 药物、试剂及仪器 Waters 2695系列高效液相色谱(HPLC)仪(包括:PDA2996,Empower数据处理软件),Waters公司。氧化型谷胱甘肽二钠注射液(批号,俄罗斯Pharm BAM;氧化型谷胱甘肽二钠原料(批号:080716-1、080716-2、080716-3),广东省中药研究所;对照品(纯度99.8%,HPLC面积归一化法测定批号080510),自制。 2 方法 2.1 m辛烷磺酸钠标准品溶液的制备 反相色谱柱Zorbax XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);以0.0 0 6 M辛烷磺酸钠溶液(称取辛烷磺酸钠1.3g,加水溶解使成1000 ml,加三乙胺10 ml,磷酸调节pH3.0,经0.45μm的微孔滤膜滤过,即得)-甲醇(95:5)为流动相,检测波长为210 nm,柱温30℃;理论板数应不低于2500;对照品色谱图上各色谱峰的分离度应符合要求。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照溶液 2.2.2 试验溶液a 2.2.3 试验溶液b 2.2.4 对照溶液 2.3 试验结果及讨论 未破坏样品:取本品40 mg,加流动相稀释定溶至10 ml容量瓶,制成每1 ml约含1.0 mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。 光照破坏:取本品约100 mg,置紫外光(254 nm)下照射3 h,称取40 mg,加流动相稀释定溶至10 ml容量瓶,制成每1 ml约含1.0 mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。 热破坏:取本品40 mg,加流动相稀释定溶至10 ml容量瓶,制成每1 ml约含1.0 mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液,在100℃水浴加热3 h,放冷。 酸破坏:取本品40 mg,加入1 mol/l盐酸溶液2 ml破坏3 h后;加入2 ml的1 mol/l氢氧化钠溶液中和,再加流动相稀释制成每1 ml约含1.0 mg的溶液。 碱破坏:取本品40 mg,加入1 mol/l氢氧化钠溶液2 ml破坏3 h后;加入等量的1 mol/l盐酸2 ml溶液中和,再加流动相稀释定溶至10 ml容量瓶,制成每1 ml约含1.0 mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。 氧化破坏:取本品40 mg,加30%双氧水2 ml破坏3 h后;加加流动相稀释定溶至10 ml容量瓶,制成每1 ml约含1.0 mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。 辅料:取本品辅料26 mg,加流动相稀释制成相应浓度的辅料溶液。 氧空白:取2 ml30%双氧水,加流动相稀释定溶至10 ml。 酸碱空白:分别去2 ml盐酸和2 ml氢氧化钠混合并加流动相定容至10 ml。 溶剂空白:取流动相作为空白溶液。 精密量取各液10μl,注入液相色谱仪。试验结果表明,本品在各破坏条件下,都产生不同程度的降解;杂质峰与主成分峰分离良好,溶剂(流动相)和辅料在此条件下没有干扰,结果见图1-4,因此该色谱条件适宜检查本品的有关物质。 2.4 线性回归试验 取氧化型谷胱甘肽标准品约50 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为母液。精密量取母液0.5 ml、1 ml、2 ml、5 ml,置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为各浓度梯度的供试液。精密量取供试液10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。由供试液浓度C对峰面积A进行线性回归,回归方程A=690412×C-10871,r=0.9999。本品进样量在0.5 ng/ml～10 ng/ml范围内呈良好线性(图5)。 2.5 精密度测试 精密量取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,进样精密度RSD=0.02%(n=6), 2.6 方法标准进样测定 精密量取供试品溶液B10μl,注入液相色谱仪,分别于0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h进样,记录峰面积,并计算平均值和相对标准偏差。进样稳定性RSD=0.13%(n=6),表明样品在8 h内稳定。 2.7 加样回收率试验 精密称取本品原料40 mg、50 mg、60 mg,与辅料按处方量混合,每组不同比例各3份;加流动相溶解并定量稀释制成至100 ml的溶液,作为供试溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液10μl,注入色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算本品的含量,计算回收率R S D=0.94%。试验结果表明,按照处方比例,投料量在80%～120%时,本品含量测定方法的回收率良好,无明显差异。 2.8 外