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无机抗菌剂的抗菌性能检测方法 有机抗菌剂是一种利用有机重金属离子抗菌作用的新型抗菌材料。与有机抗菌剂相比，它具有光谱、耐盐性和安全性。随着人们对环境质量要求的提高,无机抗菌剂具有广阔的市场前景。但目前对该类抗菌剂抗菌性能的检验尚无统一标准,对抗菌加工品的抗菌性能测定仅见于行业参考,并且不同抗菌剂抗菌性能间的比较缺乏规范标准,有较大的随机性。本文探讨了无机抗菌剂对细菌的作用,综述了国内外常用的测定方法,旨在为无机抗菌剂及其加工品的性能评价提供合适的检测手段。 1 静菌作用的测定 无机抗菌剂对细菌的作用表现在两个方面:抑菌与杀菌。抑菌指在细菌的增殖期,无机抗菌剂吸附于细胞壁上,与细胞膜蛋白(如S-S键)结合,破坏膜中的酶,防止细胞生长所需能量代谢的电子传递,抑制细菌个体生长的作用,又称为静菌作用。杀菌是指当细菌处于非增殖期时,无机抗菌剂对细胞膜酶的破坏,导致细菌维持个体生存所需的能量代谢不能正常进行而死亡的作用。 1.1 抗菌药剂的诱导效果 若细菌在生长初期的菌数为N0,经t时间细胞分裂,其菌数N与时间关系如下: In(N/N0)=μt (1) 式中μ称为该菌繁殖的比增殖速度。 若有抗菌药剂存在,由于静菌作用,细菌的比增殖速度降为μi,可用增殖阻害度H来表示抗菌剂的静菌力大小: H=(μ-μi)/μ (2) H与药剂浓度C的关系,可用一经验式来表达: H=Cn/(In5050n+Cn) (3) 式中I50是当细菌50%受阻时药剂浓度。 将(2)式代入(3)式得: μ/μi=1+(C/I50)n(4) 另外,在诱导期,添加抗菌药剂后细菌生长的诱导时间τi较无添加时的诱导时间τ更长。同样用H来表示阻害度: H=(τi-τ)/τ (5) 可得τi/τ=1+(C/I50)n(6) 由上可知,抗菌剂的静菌力是与Cn成比例的,抗菌剂浓度的增加,将导致细菌发育强烈受阻。 1.2 浓度对抗菌活性的影响 若稳定期的细菌菌数为N0,加入抗菌剂后菌数减少到N,可用式(7)来表示两者间的关系: In(N/N0)=-Kdt (7) Kd称为杀灭速度常数,它与抗菌剂浓度有关: Kd=KCn(8) K随菌种、抗菌剂不同而不同。 由上可知,抗菌剂的K越大,其杀菌作用越强;同一抗菌剂的杀菌力随浓度增大而急剧上升。 日本的桧山圭一郎研究了不同浓度的醋酸银对金黄色葡萄球菌生长的影响,得到的增殖曲线表明:低浓度的药剂使细菌诱导期变长,但对比增殖速度的影响并不明显;当药剂浓度增大到一定值时,菌数下降,说明高浓度的药剂对细菌直接起杀灭作用。他还考察了稳定期抗菌剂对菌体的影响,得到的死灭曲线是直线,可知抗菌剂对细菌的杀灭是完全的一次反应。 2 杀菌力与静菌力 如前所述,抗菌剂抗菌性能包括抑菌作用(即静菌力)与杀菌作用(即杀菌力)。对于抗菌剂本身抗菌性能的检测,包括静菌力评价与杀菌力评价两方面的内容。 2.1 静菌力评价 静菌力一般采用电导率法或MIC法来评价。 2.1.1 有好的微生物生长 微生物在生长过程中,消耗营养液中的蛋白质而放出有机酸和氨基酸两种电解质。微生物生长越快,电解质浓度就越大,营养液的导电性也越好,电导率也就越大。以不含抗菌剂的菌营养液作参比,以加有抗菌剂的菌营养液为处理液,比较两种条件下电导率的变化趋势,就可推断抗菌剂的静菌力。 2.1.2 抗菌剂mic值的测定 MIC是指使微生物发育受阻所需的最小抗菌剂浓度。MIC值越小,抗菌剂的静菌活性越大。MIC的测定有两种方法,其一是液体稀释法。以不含无机抗菌剂的菌液作参比,以营养液作稀释液,把抗菌剂液稀释不同倍数后,加入一定浓度的菌液,混合后作处理液。测定参比液与处理液各自的浊度,若抗菌剂浓度为Cx的处理液浊度与参比液浊度相等,则此Cx即为MIC值。其二是固体稀释法(即培养基法)。在培养基中加入不同量的抗菌剂,混凝成平板,培养菌种,1周后观察菌种生长情况,不生长菌的平板所含抗菌剂浓度即为该抗菌剂的MIC值。后法操作较简单,但影响因素多,结果较粗。 2.2 消毒能力的评价 杀菌力可通过测定细菌数量、浊度、MBC等值来评价,相应的方法分别称为细胞数量测定法,比浊法和MBC法。 2.2.1 菌落计数法colitact 通过测定比较参比样与抗菌剂处理样细菌数量的增减来评价抗菌性能。细胞数量的测定,多采用菌落计数法(colony count)。 对于微生物,在理论上可认为高度稀释时每个活的单细胞均能繁殖成一个菌落(colony),因而可以用培养的方法使每个活细胞生长成一个单独的菌落,并通过长出的菌落数去推算菌悬浮液中的活菌数,由此而来的方法即为菌落计数法。以菌液作为参比液,在菌液中加入抗菌剂后,采用平板涂抹法,在37℃培养条件下培养24h后测定参比液与