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精子体外处理技术对供精人工授精妊娠率的影响 近20年来，随着助产性技术的快速发展，越来越多的新技术和新方法被应用于非子女的治疗。就男性不育夫妇而言,精子库技术和人工授精仍然是最常用的方法。目前,供精人工授精(AID)的妊娠率不够理想。本文探讨在供精人工授精过程中精子的体外处理对妊娠率的影响,以图提高AID的妊娠率。 数据和方法 一、 患者年龄分布情况 2003年1月—2005年12月就诊于本院的241对不育夫妇,其中男方无精子症228例,严重少弱精子症13例。女方年龄22~35岁,平均(2 9.7±3.6)岁,不孕年限2—12年,平均(4.2±2.6)年。所有患者按卫生部规定的AID管理规定准入。精液来源于广东省人类精子库。 二、 方法 1. 注射hcg后mdd (1)自然周期组:于月经周期的第12天开始行阴道超声监测;(2)克罗米芬(CC)组:于月经第3~5天开始,每日服CC 50mg,连续5d,然后行超声监测;(3)促性腺激素组:在月经周期的第3~5天开始注射人绝经期促性腺激素(HMG)每日150IU,连续5d,然后根据卵泡发育调整剂量直到成熟后停药。当LH峰出现或卵泡直径平均达18mm时,注射HCG 5 000~10 000IU,18h或36h后行AID。第1次AID后24h超声提示尚未排卵,则再次行AID。排卵后予以黄体功能支持治疗,每日注射黄体酮20m g,连续10d。 2. fsp的培养 ICI精液进行常规复苏,IUI精液洗涤采用一步离心法,FSP的精液处理先用一步离心法处理后,再用相应的培养液稀释至3~4ml,放置于CO2培养箱内培养30~60m in。 3. 液配制、配制和使用 采用Tyrode’s、BWW、IVF30、HTF等4种培养液,Tyrode’液按配方自行严格配制,BWW、IVF30来自Vitrolife公司的系列试剂,为瑞典Vitrolife公司产品;HTF液为Quinn’s AdvantageTMFertilization系列,购自协和医药公司,为美国Sage公司产品。 4. 主要实验设备 5. 精子悬液的使用 受者取膀胱截石位,暴露宫颈后,用1ml的注射器与特制的无损伤导管连接,吸取经处理后的精子悬液0.5~1ml,将导管轻轻插入宫颈或宫腔,于2~3min将精子悬液注入后,缓慢取出导管,臀高位仰卧30min。FSP用CCD公司生产的专用FSP导管,具体手术操作见文献。 三、 统计处理 所有数据输入SPSS 8.0软件,采用t检验和x2检验。 结果 一、 精子密度和活动率 由表1可知,241对夫妇进行的431个AID治疗周期中,冷冻精液经复苏后和经Tyrode’液、BWW处理后精子密度和活动率差异无显著意义(P0.05),而经IVF30、HTF处理后精子的活动率较Tyrode’液、B W W处理后显著提高(P0.0 5)。 二、 催化期妊娠率 2 1 0个自然周期共妊娠1 5例,周期妊娠率为7.14%。其中用原冷冻精液经复苏后行宫颈管内人工授精(ICI)102周期,周期妊娠率为6.8%(7/1 0 2);1 0 8例用Ty r o d e’液、B W W液I V F 3 0液和HTF液处理后行IUI或FSP,HTF组和IVF30组的妊娠率显著高于Tyrode’液组和BWW组(P0.0 5),见表2。 三、 两组率比较 由表3可知,在超排卵周期中,70例复苏精液直接行ICI,妊娠率为7.14%(5/70),显著低于用培养液处理后行IUI或FSP组(P0.05)。在4种培养液的比较中,以IVF30液和HTF液行处理精液后的妊娠率最高(P0.05)。 四、 妊娠率的比较 在431个AID治疗周期中共47例妊娠,周期妊娠率为10.90%。由表4可知,ICI的妊娠率为6.98%(12/172),I UI的妊娠率为13.54%(26/192),FS P的妊娠率为1 3.4 3%(9/67)。I UI的妊娠率以IVF 30液处理后最高(25.00%),FS P的妊娠率以HT F液处理后最高(23.53%),IVF30组和HT F组行IUI和FSP的妊娠率与复苏精液、Tyrode’液和BWW液组相比较差异有显著性意义(P0.005)。 精子培养液、培养基和给药方法的选择 人工授精是治疗不育症的有效方法之一。对患有少精子症、无精子症以及遗传性疾病的男性,可采用AID的方法达到妊娠的目的。人工授精的成功率各家报道不一,这可能是由于在人工授精的原因和适应证的选择、精液质量和处理方法以及是否采用促排卵方案等方面不同造成的。国外资料表明采用促排卵结合宫腔内人工授精(I UI),其周期妊娠率为14.6%~19.7%。总的来说,人工授精的妊娠率不够理想。作为辅助受孕的介质培养液是精子在体外孵育、筛选的主要环境,直接影响到精子