高效氟氯氰菊酯的分离、纯化和高效液相色谱-串联质谱法测定.docxVIP

高效氟氯氰菊酯的分离、纯化和高效液相色谱-串联质谱法测定 1 hplc分析方法 有效氟氰化钾（59）是由四种异构体组成的混合化合物，约为1.36。261。它们是：顺式Ⅰ∶1R,3R，αR+1S,3S，αS；顺式Ⅱ∶1R,3R，αS+1S,3S，αR；反式Ⅰ∶1R,3S，αR+1S,3R，αS；反式Ⅱ∶1R,3S，αS+1S,3R，αR。CAPIC给出的HPLC分析方法使用的流动相特-丁基甲醚和四氢呋喃较为少见；国内定量分析研究的报道很少，而一般的气相色谱法不能将4个非对映异构体分离。作者最近研究了一种分离氟氯氰菊酯4个非对映异构体的HPLC方法，准确度和精密度都能满足高效氟氯氰菊酯定量分析的要求。 2 实验部分 2.1 高效氟氯氰菊酯 KLC 321型高效液相色谱仪（中国科学院上海原子核所科学仪器厂），HP 3392A积分仪（美国HP公司）。高效氟氯氰菊酯标准品99.0%，高效氟氯氰菊酯原药97%（均为本所分离提纯），2.5%高效氟氯氰菊酯乳油（自制）。正己烷、乙腈、三氯甲烷（分析纯）。 2.2 氟氯氰菊酯柱温 色谱柱250mm×4.6mm不锈钢柱，内填Kromasil-Si，粒径5μm（南开大学生命科学院）；检测波长254nm；柱温：室温；流动相：正己烷+乙腈+乙酸乙酯=98.95+0.8+0.25(V/V/V）；流速：2.0mL/min；量程：0.04AUFS；进样量：20μL。在上述色谱条件下，氟氯氰菊酯低效顺式Ⅰ保留时间约为11.1min，高效顺式Ⅱ保留时间约为12.8min，低效反式Ⅰ保留时间约为13.8min，高效反式Ⅱ保留时间约为15.3min。色谱图（图1）。 3 测量步骤 3.1 正己烷溶液配制 称取高效氟氯氰菊酯标样0.25g（精确至0.000 2g），置于25mL容量瓶中，用4mL三氯甲烷振动溶解后，再用正己烷稀释至刻度，此溶液浓度为10mg/mL。从上述溶液中分别吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL溶液于5个5mL容量瓶中，用正己烷稀释到刻度，摇匀备用。最终高效氟氯氰菊酯系列标准溶液：1.0、2、4、6、8、10mg/mL。 3.2 氯甲烷溶液 称取高效氟氯氰菊酯标样0.06g（精确至0.000 2g），置于10mL容量瓶中，用1mL三氯甲烷振荡溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀备用。 3.3 高效氟氯氰菊酯乳油的制备 称取含有0.06g高效氟氯氰菊酯原药或2.5%高效氟氯氰菊酯乳油（精确至0.000 2g），于10mL容量瓶中，用1mL三氯甲烷振荡溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀做样品溶液备用。 3.4 测量 按上述色谱条件，连进数针标样溶液，待相邻2针的相对响应值变化1.5%时，按照标样溶液、样品溶液、样品溶液、标样溶液的顺序进样测定。 3.5 氟氯氰菊酯含量计算 将测得的2针试样溶液以及其前后2针标样溶液中氟氯氰菊酯峰面积和分别进行平均。以质量分数表示氟氯氰菊酯的含量W（%）按式（1）计算： 式中：Ai—试样溶液中氟氯氰菊酯（高效顺式Ⅱ+高效反式Ⅱ）峰面积的平均值; As—标样溶液中氟氯氰菊酯峰面积（高效顺式Ⅱ+高效反式Ⅱ）的平均值; mi—试样的质量，单位为g。 4 结果分析 4.1 氟氯氰菊酯进样质量的影响 表1为高效氟氯氰菊酯不同进样质量和峰面积的数据，以氟氯氰菊酯高效顺式和高效反式峰面积之和为纵坐标，以进样质量为横座标，求出直线回归式：y=0.027 2+0.010 5x，相关系数（r）为0.999 9，说明当氟氯氰菊酯进样质量在20.0～200μg时，与峰面积呈较好的线性（图2）。当高效氟氯氰菊酯定量分析时，进样质量应在上述范围内选取。 4.2 分析的准确度结果统计量 通过标准加入量法，测定的平均回收率为100.37%，回收率的范围为99.88%～100.73%，说明分析的方法准确度能满足分析的需要。 4.3 分析方法的精密度 通过对高效氟氯氰菊酯原药和2.5%高效氟氯氰菊酯乳油同一样品的各自的4次称样分析，高效氟氯氰菊酯分析的精密度较好，原药分析的变异系数为1.13%，乳油分析的变异系数为1.58%，说明本分析方法的精密度能满足定量分析的要求。 5 氟氯氰菊酯溶剂 5.1 氟氯氰菊酯的立体异构体的分离报道很少，本文流动相中加少量乙酸乙酯对基线有稳定作用。高效氟氯氰菊酯在正己烷中溶解度较小（1～2g/L），可加少量氯仿或二氯甲烷加速溶解，但应该注意的是不要全部使用三氯甲烷做溶剂，否则会使异构体分离度降低。 5.2 氟氯氰菊酯和氯氰菊酯化学结构非常相似，只是在氯氰菊酯苯基的4位上增加1个氟原子，所以作者开始试用氯氰菊酯的分析方法来分析氟氯氰菊酯。但结果表明，氟氯氰菊酯的4个非对映异构体不能达到完全分离，同样本方法也不能用于分析氯氰菊酯的异构体。 5.3 本方法可直接用于氟氯氰菊酯的异