点刺委中放血治疗实验性腰椎间盘突出症的机制研究.docxVIP

点刺委中放血治疗实验性腰椎间盘突出症的机制研究 根据许多研究，神经传导速度与白细胞介素1（il-1）的水平以及腰椎突出症（lidt）的治疗密切相关。在许多研究中，这两个指标被用作评估治疗效果的参考之一。资料显示:提高神经传导速度与降低IL-1α水平是针灸治疗 LIDP的重要机制之一, 但是治疗方法多选用毫针、电针与穴位注射, 而点刺放血治疗LIDP机制的实验研究鲜有报道。《黄帝内经》中多处提到治疗腰腿痛均采用委中穴点刺放血的疗法, 临床报道点刺委中穴治疗LIDP是有效方法之一。本实验试图通过观察实验性LIDP家兔坐骨神经传导速度 (sciatic nerve conduction velocity, SNCV) 和髓核组织中IL-1α水平变化来探讨点刺“委中”放血治疗LIDP的机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物 健康新西兰家兔 40只, 雌雄各半, 体重1.5～2.0 kg, 由湖南中医药大学实验动物中心提供。 1.2 主试剂和材料 IL-1α酶联免疫吸附 (ELISA) 试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司;中号三棱针, 苏州康年医疗器械有限公司生产。 1.3 动物病理模型及ct模型的建立 40只家兔完全随机分为4组:A为空白组, B为LIDP模型组, C为点刺委中组, D为点刺非穴对照点组, 每组10只。动物首先禁食不禁水 1 d, B、C、D组用自制的LIDP动物病理模型造模器造模。抽样腰椎间盘CT检测造模成功后, 第2天A、B组家兔捆绑 5 min 不作处理, C、D组分别点刺“委中”与对照点放血, 各组治疗均每天1次, 左右交替, 连续处理 7 d。第9天 (即最后1次处理后 24 h) 所有家兔取材并测定各项指标。 1.4 l6-7腰椎间隙有限元模型的建立 参照沈为栋报道的方法, 将直径 1.6 mm 的上颌窦穿刺针改制为自制的LIDP动物病理模型造模器, 建立 LIDP病理模型。 在无菌条件下, 取左下腹部旁正中切口, 显露椎间隙前方的前纵韧带及椎间隙后, 用造模器于 L6-7椎间隙取45度斜径位向右刺入7.80～8.00 mm, 固定针管, 用平头针芯将针管内椎间盘组织推至后纵韧带的前方, 造成L6-7椎间盘右侧突出模型。缝合伤口, 术后将家兔送回动物房饲养。 1.5 点1:“委中” 参照林文注主编《实验针灸学》常用动物穴位定位法取家兔双侧“委中”穴。对照点设在“委中”穴内侧旁开 1.0 cm。C、D组家兔定穴剪毛, 并用力拉直家兔的膝关节, 皮肤绷紧, 以三棱针对准消毒的“委中”穴或对照点处, 迅速刺入0.4～0.6 cm, 立即退出, 使出血1～2滴, 再在针刺处消毒。 1.6 snpv的测定 SNCV的测定:在 20%的乌拉坦 (4 mL/kg) 耳缘静脉注射麻醉下, 用2根长度为 13 mm、直径为 0.28 mm 的电极分别刺入股骨颈的上下两端作为坐骨神经上端的刺激电极, 另外再用2根电极刺入股骨外上髁的上缘及其上 0.5 cm 处作为坐骨神经下端的刺激电极, 无关电极置于家兔臀部。在家兔的外踝上 1 cm 处向内上方腓肠肌肌腹刺入一同心圆电极以记录电刺激诱发的腓肠肌动作电位, 予 BL-410生理信号记录系统记录神经干兴奋传导速度。电刺激器的刺激参数为:频率 1 kHz, 时间常数 0.001 s, 刺激方式:串刺激, 波宽:0.05 ms, 波间隔:500 ms, 强度:5.0 mV, 串长:10个/次 。根据分别刺激坐骨神经两点诱发腓肠肌动作电位的 M波潜伏期的差值 (L) 及两刺激点间的距离 (D) , 计算出SNCV。计算公式为:SNCV=D/L。 IL-1α含量的测定:耳缘静脉注射 40 mL 空气处死动物, 取L6-7椎间盘的髓核组织, 用生理盐水冲洗残留物, 称重, 按 2 mL/400 mg 加入生理盐水, 用玻璃匀浆器研磨40～50次, 制成髓核组织匀浆, 离心 (4 000 r/min, 4 ℃, 10 min) 后, 取上清液, -20 ℃ 低温保存。IL-1α含量采用ELISA法测定, 具体步骤按试剂盒说明书进行。 1.7 准差—统计学处理 数据用SPSS 13.0软件进行统计分析, 用均数±标准差(—x±s)(x—±s)表示, 计量资料的组内前后比较用配对t检验, 多组间比较用单因素方差分析, 继以LSD检验, 或用Tamhaneapos;s T2法。 2 结果 2.1 各组snpv的比较 如表1所示, 造模前各组SNCV比较差异均无显著性意义 (P0.05) ;除空白组外其它各组家兔造模后的SNCV均显著低于造模前 (P0.01) ;各组治疗前后SNCV比较, 点刺委中组治疗后SNCV显著高于治疗前 (P0.01) , 其它各组治疗后的SNCV与造模后比较差异均无显