犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染小鼠的治疗作用.docxVIP

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染小鼠的治疗作用 病毒性肺炎属于中医热病范畴，是由感觉温暖和邪恶的环境引起的。从温热病的卫气营血发展规律来看,初起病在肺卫,进而入于气分,因“温邪则热变最速”,故又极易入营劫血。犀角地黄汤合银翘散是源于《温病条辨》的经典合方,该方以银翘散清解卫分之毒,以犀角地黄汤解营血之毒,两方相合,具有清热解毒、凉血止血、化瘀通络之功效,临床治疗病毒性肺炎可见良效。本研究以流感病毒感染小鼠为模型,观察犀角地黄汤合银翘散对病毒性肺炎小鼠的治疗作用及对肺组织病理改变的影响,为犀角地黄汤合银翘散治疗病毒性肺炎提供实验依据,为丰富和发展温病卫气营血辨证理论提供依据。 1 材料表面 1.1 京 ICR小鼠、BALB/c小鼠均购自北京维通利华实验动物中心,动物许可证号为SGXK(京)2007-0001。病毒株:流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株A/1/34(H1N1),由中国预防医学科学院病毒学研究所提供,常规鸡胚复苏传代,血凝滴度为1∶512,采用Reed Muench法测定计算其对小鼠的半数致死量(LD50)为10-3.877。 1.2 水生动物的制备 犀角地黄汤合银翘散(水牛角 30 g、生地 30 g、芍药 12 g、丹皮 9 g、连翘 9 g、银花 9 g、苦桔梗 6 g、薄荷 6 g、竹叶 4 g、生甘草 5 g、荆芥穗 5 g、淡豆豉 5 g、牛旁子 9 g)制成水煎剂,药材购自北京同仁堂药店。成人生药量为 2.3 g/kg,小鼠的等效剂量为成人的10倍即23 g/(kg·d)。利巴韦林注射液购自天津药业焦作有限公司(批。 2 方法 2.1 给药剂量及给药方式 ICR小鼠120只,体重14~16 g,随机分为正常组、模型组、犀角地黄汤合银翘散中药组(分为中药高、中、低剂量组)和利巴韦林组,每组20只,雌雄各半。小鼠在乙醚轻度麻醉下,除正常组外每只小鼠以25 μL 50LD50病毒液滴鼻感染,正常组用等量无菌PBS液滴鼻。感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃;犀角地黄汤合银翘散高、中、低剂量组分别给予犀角地黄汤合银翘散46、23、11.5 g/(kg·d)灌胃;利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液0.1 g/(kg·d);各组均为给药2次/d,连续给药7 d。逐日观察小鼠发病症状、体重、体温、存活时间以及死亡数,连续观察14 d。 2.2 肺匀浆的检测 雄性BALB/c小鼠72只,体重16~18 g,随机分为正常组、模型组、犀角地黄汤合银翘散中药组和利巴韦林组,每组18只,以25 μL 50LD50病毒液滴鼻感染,1 h后给药,方法同上,犀角地黄汤合银翘散组为临床等效剂量23 g/(kg·d)。在感染后第2、4、6天,每组取6只小鼠处死,摘取肺脏,取左肺称重后置匀浆器中加生理盐水[肺重(g)/生理盐水(mL)=1/9],研磨制成匀浆,离心(4 ℃,2 500 r/min,20 min)后取上清,按照常规方法做微量血凝试验,以出现“++”的肺匀浆上清最高稀释度为血凝终点,以该稀释度的倒数即为病毒的血凝滴度。取右肺经常规固定、包埋、切片、HE染色后,光镜下观察肺组织病理改变;感染后第6天,每只鼠在相同部位取1 mm3肺组织,用2.5%戊二醛前固定,1%锇酸后固定,Epon812 包埋,切成超薄切片,1%醋酸双氧铀及枸橼酸铅双重染色,透射电镜(PHILIPS TECNAI-10)下观察肺组织的超微结构变化。 2.3 比较方法 实验数据采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。计量资料以均值±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,多组间差异采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两两组间比较用LSD法;计数资料用χ2检验统计,P0.05为有显著性差异。 3 结果 3.1 各组生存率和平均生存天数 模型组生存率仅为10%,平均存活天数为6.3 d,犀角地黄汤合银翘散组生存率和平均存活天数明显升高,其中中剂量组与模型组相比有显著差异(P0.05);利巴韦林组生存率和平均存活天数接近于正常组。结果见表1。 3.2 各组小鼠体裁比较,见表1 正常组小鼠体温一直稳定在37.5~38 ℃之间,波动不大。模型组小鼠从第2天起体温开始下降,低于正常组(P0.05),第3天、第4天明显降低,与正常组相比有显著性差异(P0.01)。与模型组比较,利巴韦林组小鼠从第2天起体温高于模型组(P0.05),第3天、第4天升高明显,与模型组相比有显著性差异(P0.01);犀角地黄汤合银翘散中剂量组体温从第3天开始显著高于模型组(P0.01)。因第5~8天为死亡极期,故体温数据截止到第4天。结果见表2。 3.3 模型小鼠体重的变化 正常组小鼠体重持续稳步上升,而模型组小鼠从第4天起体重持续明显下降,与正常组相比P0.01,利巴