微生物学课件：营养缺陷型突变株的筛选.pptVIP

Company Logo Company Logo Add Your Company Slogan Company Logo * 3类突变株的筛选方法 1.产量突变株的筛选 3.营养缺陷型突变株的筛选 2. 抗药性突变株的筛选 Company Logo * 营养缺陷型突变株筛选 1.基本概念 3.营养缺陷型突变株的应用 2. 营养缺陷型突变株筛选方法 Company Logo * 一、基本概念—3类遗传型个体 营养缺陷型突变株(auxotroph)：菌株由于发生了丧失某种酶合成能力的突变，因而只能在加入该酶合成产物的培养基中才能生长，这类突变株称为营养缺陷型突变株。表示为：A- 高丝氨酸脱氢酶（HSDH) 野生型菌株(wild type strain)：是指从自然界中分离出的任何微生物；这里指发生营养缺陷型突变前的原始菌株。表示为：A+ 原养型菌株(prototroph)：当营养缺陷型突变株发生回复突变或遗传物质重组后，其营养要求与野生型表现相同，这类菌株成为原养型菌株。表示为：A+ Company Logo * 一、基本概念—3类培养基 基本培养基（minimal medium, MM）：仅能满足野生型菌株生长所需要的最低成分的培养基。表示方法为：[-] 完全培养基（complete medium, CM）：能满足一切营养缺陷型菌株生长所需要的营养要求的培养基。表示方法为：[+] 补充培养基（supplemental medium, SM）：在MM中添加某一营养缺陷型所不能合成的相应代谢产物以满足该缺陷型生长所需要的营养要求的培养基。表示方法为：[A] 一种基本培养基－M9 medium (g/L) ： Na2HPO4 12.8g KH2PO4 3.0g NaCl 0.5g NH4Cl 0.5g 葡萄糖 10.0g VB1 1μg/ml；自然pH 不能错误的认为基本培养基均是简单的，不含生长因子的 在MM中加入一些富含氨基酸、维生素、和碱基的天然物质，如酵母膏、蛋白胨等 该培养基可专门用于选择相应缺陷型突变株 Company Logo * 3种遗传性个体的营养要求 菌株 能生长的培养基 MM SM CM 野生型 ＋ ＋ ＋ 原养型 ＋ ＋ ＋ 营养缺陷型 － ＋ ＋ Company Logo * 二、营养缺陷型突变株的筛选方法 诱变 淘汰野生型 检出缺陷型 鉴定缺陷型 Company Logo * 淘汰野生型的方法 抗生素法 菌丝过滤法 Company Logo * 抗生素法 抗生素法 青霉素法 制霉菌素法 原理 抑制细菌细胞壁肽聚糖合成；只杀死生长菌体 作用于真菌细胞膜上的甾醇，引起细胞膜损伤；只杀死生长菌体 适用的微生物 细菌 真菌 Company Logo * 淘汰野生型的操作方法和步骤 诱变处理后的菌体 培养于MM中并用抗生素处理 结果 野生型被杀死 缺陷型未被杀死 Company Logo * 用青霉素淘汰野生型细菌的方法和步骤 将诱变处理后的菌体在CM中培养2～3代 结束表型延迟现象，达到稳定的表型和生理状况 离心、洗涤，转到MM中饥饿培养4～6h 去掉来自CM的营养和消耗从CM摄取并储存在菌体内的营养，防止由此使缺陷型生长而被以后加入的青霉素杀死 接种到含无机氮的高渗MM中培养3～4h（野生型菌刚刚进入对数期），加入一定浓度的青霉素 阻止菌体原生质体破裂外渗，使缺陷型菌株免遭杀伤 洗涤 目的是什么？ 移到不含青霉素的低渗溶液中，稀释涂平板分离 用什么培养基？ Company Logo * 菌丝过滤法 适用于进行丝状生长的真菌和放线菌 原理：野生型孢子在MM中萌发长成菌丝，而缺陷 型的孢子则不能。 诱变后的孢液 于基本培养基中培养至萌发菌丝刚刚肉眼可见 用灭菌脱脂棉、滤纸或玻璃漏斗除去菌丝 继续培养，每隔3～4h过滤一次，重复3～4次 稀释并涂平板分离 Company Logo * 检出缺陷型的方法 用一个皿检出：夹层培养法、限量补充培养法 用两个皿检出：逐个检出法、影印接种法 Company Logo * 夹层培养法示意图 Company Logo * 逐个检出法示意图 Company Logo * 影印接种检出法示意图 Company Logo * 鉴定缺陷型的方法 目的：测定营养缺陷型菌株所需的生长因子的种类 鉴定方法： 1、在一个培养皿中加入一种营养物质：用于测定多株缺陷型菌株对该生长因子的需求情况 2、在一个培养皿上测定一种缺陷型菌株对多种生长因子的需求情况－－生长谱法 在含菌的平板表面加微量营养物质，看某营养物质的周围是否有菌生长来确定该军的营养要求的一种测定方法 Company Logo * 营养缺陷型生长谱确定 测定缺陷型菌株所