三棱水煎液与芒硝配伍水煎液的谱图融合研究.docxVIP

三棱水煎液与芒硝配伍水煎液的谱图融合研究 “19岁担忧”歌曲的配方可以在明代刘春的经典内科小学找到。其指出了共19个相畏的药物, 其中包括“牙硝难合京三棱”。京三棱又称荆三棱、草三棱、石三棱等, 性味平、苦, 无毒, 主治症瘕鼓胀、痃癖、小儿气癖、乳汁不下等。牙硝, 又称马牙硝, 性味甘、大寒, 无毒, 能除五脏积热伏气。马牙硝是朴硝的一种, 朴硝在盆中煎炼时, 在上层, 有牙状结构者, 称为马牙硝。 三棱中主要含有的化学成分有挥发油类、有机酸类、甾体类、黄酮类、苯丙素类等多类成分, 而单波长的色谱指纹图谱无法对其进行整体表达和全面评价。因此本实验建立多个特征吸收波长下的色谱图, 经筛选将254、300、320 nm的色谱图进行融合以实现对二者配伍后物质基础变化的全面和整体评价。 1 仪器、试剂和试剂 Agilent 1100 Series高效液相色谱仪 (配有DAD、自动进样器) ;ChemStation工作站 (Agilent科技有限公司) ;Shim-pack CLC-ODS (150 mm×6.0 mm, 5 μm) 色谱柱;HS6150型超声波清洗器 (天津恒奥科技发展有限公司) ;CP225D电子分析天平 (德国Sartorius, 十万分之一) 。甲醇 (高效液相色谱纯, 天津市科密欧化学试剂有限公司) , 水为去离子水。样品三棱、芒硝购自大连药房, 经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定均为正品。本实验所用三棱为荆三棱生品。实验中用芒硝代替牙硝, 虽然名称不同, 但物质基础一样, 不影响结果。 2 方法和结果 2.1 柱温2.2检测条件 色谱柱:Shim-pack CLC-ODS (150 mm×6.0 mm, 5 μm) ;流动相:A-水, B-甲醇 (梯度洗脱程序:0~10 min, 2% B;10~15 min, 2%~30% B;15~25 min, 30%~33% B;25~35 min, 33%~40% B;35~70 min, 40%~50% B;70~95 min, 50%~55% B) ;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;检测波长:254、300、320 nm;进样量20 μL。 2.2 试验溶液的制备 2.2.1 回收溶剂液氯基 称取三棱药材粉末 (过60目筛) 20 g, 精密称定, 置于圆底烧瓶中, 加水200 mL, 回流提取3 h, 过滤, 滤液加甲醇至50% (V/V) , 冷处避光放置、醇沉, 过滤, 滤液回收溶剂, 用水定容至25 mL, 摇匀。精密吸取上述溶液5 mL, 置分液漏斗中, 加入2倍量乙酸乙酯萃取2次, 合并乙酸乙酯层, 挥干溶剂, 残留物用甲醇溶解, 定容至5 mL, 摇匀, 用0.45 μm微孔滤膜过滤, 即得。 2.2.2 硝化反应提取 分别称取三棱药材粉末 (过60目筛) 与芒硝各20 g, 精密称定, 置圆底烧瓶中, 加水400 mL, 回流提取3 h。按“2.2.1”项下方法, 制备合煎样品供试液。 2.3 最大峰面积覆盖融合图谱的确定 精密吸取单煎液样品供试液20 μL, 连续进样6次, 记录254、300 、320 nm波长下的色谱图, 按照最大峰面积覆盖融合图谱, 结果融合后图谱各峰相对保留时间与各峰相对峰面积的RSD均小于3.0%。表明检测系统的进样精密度良好。 2.4 最大峰面积覆盖融合图谱的测定 取单煎液样品制备供试液5份, 精密吸取供试液20 μL进样测定, 记录254、300、320 nm波长下的色谱图, 按照最大峰面积覆盖融合图谱, 结果融合后图谱各峰相对保留时间与各峰相对峰面积的RSD均小于3.0%。表明方法的重复性良好。 2.5 方法的进样分析 精密吸取单煎液样品供试液, 在制备好样品供试液后的0、2、4、6、8 h进样分析, 记录254、300、320 nm波长下的色谱图, 按照最大峰面积覆盖融合图谱, 结果融合后图谱各峰相对保留时间与各峰相对峰面积的RSD均小于3.0%。表明样品在8 h内稳定。 2.6 含量测图谱的确定 三棱水煎液与三棱芒硝合煎液进样量均为20 μL, 按照上述色谱条件, 测得254、300、320 nm波长处图谱, 经相同保留时间色谱峰按最大峰面积覆盖融合生成三波长融合图谱, 通过融合图谱比较单煎与合煎的物质基础变化。 3 综合插图方法 3.1 吸收波长的选取 采用二极管阵列检测器进行全波长扫描, 可知三棱药材样品在210~360 nm区间范围内有吸收。其中254、300、320 nm处所选目标峰分别有较大吸收, 且这三个吸收波长下的吸收峰有一定的互补性。因此本实验选取254、300、320 nm为检测波长。 3.2 谱图编码与编码 选用三棱水煎液与三棱芒硝合煎液各三波长下的色谱图为研究对象, 分别从C