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牛子苷对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响 牛干是蔷薇科植物的干燥成熟果实。现代药理学研究表明,牛蒡子提取物对实验性糖尿病大小鼠均有显著的降血糖作用,而其有效成分牛蒡子苷应用于糖尿病治疗的药理和临床报道较少。本实验腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立糖尿病小鼠模型,观察牛蒡子苷对糖尿病小鼠血糖,血脂水平的干预作用。 1 实验分组、给药与仪器 1.1 动物雄性清洁级昆明种小鼠80只,体质量(22±3) g,由安徽省医学科学研究所实验动物中心提供。 1.2 药品与试剂牛蒡子苷购于南京泽朗医药有限公司;盐酸二甲双胍,规格0.5 g/片,中美上海施贵宝制药有限公司;链脲佐菌素,购于美国sigma公司;糖化血清蛋白试剂盒,南京建成生物研究所;血清胰岛素放射免疫试剂盒,北京北方生物技术研究所。 1.3 仪器与设备美国强生血糖仪(美国强生公司);日立7020全自动生化分析仪(日本);722S紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限责任公司);r计数仪(中国科技大学中佳科技实业有限公司)。 1.4 方法 1.4.1 糖尿病小鼠模型的制备 80只昆明小鼠适应性喂养5 d后,随机取出10只作为正常对照组。所有小鼠禁食不禁水16 h,pH 4.4枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液冰浴中新鲜配制1%的STZ溶液,造模组小鼠按80 mg·kg-1腹腔注射,正常组予以等注射容量的缓冲液。自由饮食7 d后,尾尖取血,血糖仪测定血糖值,以随机血糖≥16.7 mmol/L视为糖尿病模型小鼠。 1.4.2 分组 将造模成功的40只糖尿病小鼠随机分为4组,糖尿病模型组,ARC 200 mg·kg-1,400 mg·kg-1组 ,二甲双胍500 mg·kg-1组。每组每天10 mL·kg-1容量灌胃给药,正常对照组与模型组予以等给药容量的蒸馏水,连续4周。 1.4.3 实验指标测定 给药第28天尾尖取血测各组小鼠随机血糖值。第29天处理动物,处理动物前禁食12 h。各组小鼠称重,摘眼球取血,3 500 rpm离心,收集血清,-20 ℃保存。按试剂盒说明测小鼠血清GSP,INS水平,日立全自动生化仪测小鼠血清TG,TC,HDL-C,LDL-C水平。 1.5 统计学方法数据以(xˉ±s)(xˉ±s)表示,采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析,P0.05具有显著性差异。 2 结果 2.1 arc对小鼠体重、血糖、糖化血清蛋白的影响 实验过程中糖尿病模型组,ARC 200 mg·kg-1组各死亡2只;ARC 400 mg·kg-1组,二甲双胍组各死亡1只。如表1,表2所示,实验4周后,与正常对照组相比,糖尿病模型组小鼠体重显著降低,血糖、糖化血清蛋白显著升高(P0.01);与模型组相比,ARC低、高剂量组均可显著降低糖尿病小鼠血糖(P0.05,P0.01)、糖化血清蛋白,具有统计学意义(P0.05);ARC低、高剂量组均具有升高糖尿病小鼠体重的趋势,但不具有统计学意义(P0.05)。 2.2 牛素对糖尿病大鼠血清生化水平的影响 如表3所示,与正常对照组相比,糖尿病模型组小鼠INS显著降低,ARC各组对糖尿病小鼠血清INS水平无显著性影响(P0.05)。 2.3 优化hdl-cp0.05,hdl-cp0.05水平 如表4所示,与正常对照组相比,模型组小鼠TC,TG,LDL-C水平显著提高(P0.05,P0.01,P0.05),HDL-C(P0.01)水平降低;高剂量ARC组可显著降低糖尿病小鼠血清中TC,TG水平(P0.05),对血清中HDL-C水平有升高趋势但无显著性差异(P0.05),而对血清LDL-C水平无明显影响(P0.05)。 3 糖尿病模型小鼠血清中脂质代谢异常 体内糖脂代谢紊乱是糖尿病最显著的特征,而长期高血糖,高血脂水平则会进一步加重胰岛β细胞的损害,严重威胁着糖尿病患者的身体健康。牛蒡子为菊科植物牛蒡的干燥成熟果实,是中医传统的天然降糖植物之一,为中药降糖复方的重要组分之一。药理学研究证明牛蒡子提取物对降低糖尿病动物模型血糖和防治糖尿病肾病具有良好的疗效。牛蒡子苷作为其有效活性成分之一,探索其是否具有良好的降血糖功效,是开展本实验的最终目的。STZ是目前使用的最为广泛的糖尿病动物模型诱导剂,本实验采用一次性腹腔注射80 mg·kg-1的STZ制备糖尿病小鼠模型。实验结果表明,ARC可显著降低糖尿病小鼠的随机血糖值和糖化血清蛋白值,而对血清中INS的水平无明显影响。实验结果表明ARC具有显著的降糖功能,但其降血糖功能的机制可能与促进胰岛β细胞的修复,提高胰岛素的释放无关。提示我们ARC其降血糖机制可能不依赖于胰岛β细胞的功能,而与促进组织的葡萄糖摄取,抑制α-葡萄糖糖苷酶,增加胰岛素敏感性有关,其降血糖机制需要进一步的研究。 糖尿病模型小鼠存在血脂异