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不同粉碎工艺对黑胡椒多糖溶出效果的影响 黑莓是一种担子菌，属于木耳科和木耳科。这是中国的一种珍贵药物和食品。有研究表明,黑木耳中的多糖类物质具有多种生理活性及药用价值。黑木耳细胞壁关键组分———几丁质和β-葡聚糖,质地坚韧,不易被人体所消化,细胞壁内的多糖类物质很难透过细胞壁,被人体所吸收。胞壁破碎是提取细胞内多糖类物质的关键步骤。破碎细胞壁的方法较多,其中粉碎操作是破碎黑木耳细胞壁的重要手段之一。粉碎工艺,尤其是超微粉碎工艺对于传统工艺和配方的改进,新产品的开发具有推动作用。产品物性和微观结构的改变,在提高提取效率、溶解性、吸附力、固香性、药效和生物利用率等方面得到证实。鉴于此,从产业化角度出发,以黑木耳多糖溶出量为评价指标,探讨不同粉碎工艺对黑木耳多糖类物质溶出的影响,为开发利用黑木耳资源及工业化生产提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 黑木耳,浙江省富来森绿色产业集团公司提供;无水乙醇、浓硫酸、葡萄糖、苯酚均为分析纯试剂。 1.2 微生物仪器ds/bf、超微粉碎、干燥箱wvd-1 紫外分光光度计(UV-2000)、激光粒度仪(HELDS/BF)、正置生物显微镜(NIKON Eclipse E200)、超微粉碎机(HMB-701)、旋转蒸发器(RE-52A)、微波真空干燥箱(WVD-01)。 1.3 测试方法 1.3.1 粗粉的提取 取200 g黑木耳,普通机械粗粉碎后,先用40目标准筛筛分,然后过80目筛,得不同目数的粗粉,即黑木耳机械粗粉AMP40和AMP80;再用超微粉碎机调控风机风量进行粉碎,得到不同粒径的黑木耳细粉,即黑木耳细粉1(ASP1)、细粉2(ASP2)和细粉3(ASP3)。 1.3.2 测定黑木耳干法的粒径 使用HELDS/BF激光粒度仪和VIBRI进样器,在分散压力3.01×105Pa,分散真空度8.70×103Pa,进样速率65.00%,漏斗高度2.00 mm,分散管直径4 mm的条件下测定黑木耳干粉的粒径。 1.3.3 黑粉的形状观察 取少量不同粒度黑木耳干粉,依次放在载玻片上,盖上盖玻片,分别置于生物显微镜下,放大400倍观察黑木耳颗粒的外形及碎裂情况。 1.3.4 黑木耳多糖溶出量的测定 取不同目数的黑木耳干粉20 g,在料水比1∶40,温度60℃,时间2 h条件下提取2次,合并提取液,离心,得上清液。用旋转蒸发仪减压浓缩后,加95%乙醇调至含醇量80%,4℃静置过夜,离心得粗多糖。粗多糖经Sevag法除蛋白后,加3倍量的无水乙醇使之沉淀,将沉淀分别用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤2次,微波真空干燥,得到黑木耳粗多糖。 黑木耳多糖溶出量(%)=CDf/m×100 式中,C———供试液中葡萄糖质量浓度(mg/m L);D———多糖的稀释因素(m L);f———换算因子;m———黑木耳的质量(mg)。 1.3.6 aps溶出率测定 分别准确称取不同目数的黑木耳粉2.000 g,置于250 m L锥形瓶中,加入80 m L水,温度恒定于60℃,搅拌转速为100r/min,当样品开始接触溶液时计时,分别于10、20、30、40、50、60 min定量吸取溶液2 m L,用改良的苯酚-硫酸法测定不同时间的多糖含量,换算成每分钟多糖溶出量,即APS溶出率(mg/min)。 2 结果与分析 2.1 黑粉的粒度和粒径分布 2.1.1 粉体积面积平均粒径为510 由图1可知,ASP1的粒径在68.67~210.07μm之间,粉体表面积平均粒径为119.28μm,属中粉级(按《中国药典》2005年版分类,下同)。 2.1.2 粒度分布和esp2 由图2可知,ASP2的粒径在38.64~142.47μm之间,粉体表面积平均粒径为74.37μm,属细粉级。 2.1.3 粒径大小对粉体的颗粒极细 由图3可知,ASP3的粒径在5.72~86.67μm之间,粉体表面积平均粒径为35.89μm,属于极细粉级。 综合上述实验,通过控制超微粉碎机的风机风量,可以得到不同粒径分布的粉体。按照《中国药典》2005年版(二部)的规定,粉体若能通过8号筛(90μm),均为“极细粉”,没有关于“微粉”、“超微粉”的界定。由于黑木耳属胶质菌,物料韧性较大,不易得到粒径极细的粉体。本试验中通过控制超微粉碎机电机的风机,在较低的风机风量下,可得到黑木耳的极细粉(ASP3平均粒径50μm)。 2.2 细胞破碎度 由图4可知,机械粉碎的黑木耳粉,细胞壁完整。粉体粒度越小,细胞破碎越严重,细胞内部结构越松散。超微粉碎的黑木耳粉,细胞表面细胞壁均发生不同程度的破裂,菌丝体散出,且粒度越小,细胞壁破裂越严重,菌丝体越松散。 2.3 原料粒度对多糖溶出量的影响 按1.3.3节方法提取黑木耳多糖,不同粒度黑木耳多糖的溶出量见图5。 由图5可