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大鼠椎间盘析出模型脊髓血流量的电针效应 椎间盘取出引起的运动机械障碍是人类和动物健康的重要疾病。以电针为主的针灸疗法在医学临床应用广泛,近来随着宠物医疗的发展,在运动机能障碍性疾病,尤其是犬重症椎间盘脱出/突出(intervertebral disc extrusion/protrusion)也显示出了良好的治疗效果。电针疗法对犬椎间盘病虽然疗效显著,但有关作用机理的研究鲜见报道。犬椎间盘脱出病的实质是脊髓受椎间盘压迫损伤,神经传导功能障碍。目前虽有关于脊髓损伤动物模型的报道,但是这些模型难以准确模拟临床犬重症椎间盘脱出/突出,且有关电针机理的研究以脊髓的形态学及神经细胞损伤与修复相关基因的变化等为主。然而,随着研究的深入,国内外学者越来越关注脊髓损伤与修复过程中微血管所起的重要作用;另外从中国传统兽医学分析,气血不足或气滞血瘀是伴随着犬椎间盘病各个阶段的普遍现象,有待现代微观指标的进一步验证。本实验以大鼠制作椎间盘脱出模型模拟临床急性发病犬,采用激光多普勒血流仪,研究该病脊髓的“气、血”微观指标变化规律,进而观察电针对其的影响,为进一步揭示动物椎间盘脱出/突出的“气、血”异常本质与针灸理气活血的效应和机理积累资料。 1 材料和方法 1.1 实验动物房[scxk-军 清洁级SD雄性大鼠37只,体重为200~250 g,来源于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心【SCXK-(军)2007-004】,饲养于北京农学院实验动物房[SYXK(京)2010-0003]。实验动物随机分为空白对照组、对照组和电针组,每组数量分别为:9、14和14只。对照组和电针组制作椎间盘脱出模型,电针组接受电针治疗,空白对照组只通过手术暴露脊髓,不进行脊髓压迫,也不施以任何治疗。 1.2 治疗方法与仪器 激光散斑血流监测视频系统(Peri Cam PSI System,Perimed,Sweden),仪器相关参数设定:监测激光与大鼠L1段脊髓垂直,探头与L1段脊髓背侧的监测距离设定为15 cm,分辨率为0.42 mm,监测区域设定面积为3.5 mm2的圆,圆心位于L1段脊髓背侧的中心,采样频率:每秒3帧图像;东华牌电针治疗仪(WQ-6F);毫针(苏州天协针灸器械有限公司,规格0.2×25 mm);微型摆锯(surgic XT,NSK,Japan);戊巴比妥钠(北京化学试剂公司,德国进口分装);注射用青霉素钾、注射用硫酸链霉素(河北远征药业有限公司);自制硅胶垫片(见图1:一端呈楔形,长4 mm、宽2 mm、厚1 mm,取材于8Fr无菌双腔导尿管,Create Medic Co.,Ltd.,Japan)。 1.3 骨髓细胞的分离和模型大鼠的再分离 大鼠腹腔注射戊巴比妥钠40 mg/(kg·bw),麻醉后,俯卧保定,以胸腰段椎体为中心备皮、消毒。手术严格无菌操作,以第一腰椎(L1)为中心,在背正中线处切开皮肤,切口长约2cm,常规方法暴露L1的棘突、椎板和左侧关节突,用微型摆锯打磨L1背侧及左侧椎板,再用眼科有齿镊小心去除整个背侧椎板及左侧关节突,充分暴露L1段脊髓背侧;模型大鼠用自制的硅胶片从L1的左侧将之填塞入T13段脊髓的左腹侧位(如图1所示),空白对照组大鼠同样暴露脊髓不进行压迫,血流检测完后分层缝合切口。术后每只大鼠肌内注射青霉素钾3万U/(kg·bw),2次/日,连用3 d。同时注射硫酸链霉素15mg/(kg.bw),2次/日,连用3 d,单独分笼饲养,饮水和饲料正常供给。 1.4 病例普遍穴位的治疗 将28只椎间盘脱出模型大鼠随机平分为对照组和电针组。参考课题组多年电针治疗犬胸腰段椎间盘脱出病例常用的穴位并考虑动物模型实际情况,选用足三里穴和趾间穴。毫针刺入穴位后,两侧的穴位上下为一组分别接通电针仪进行治疗(强度以大鼠能够忍受为宜)。每日上午治疗1次,每次20 min。因临床病例通常在电针治疗2周后即有明显好转,所以,初步将大鼠脊髓压迫模型的治疗时间也定为2周。 1.5 电针治疗后小鼠骨髓血流量 手术暴露对照组和电针组大鼠L1段脊髓后,以多普勒血流仪检测脊髓压迫前背侧血流量10 min。硅胶片压迫造模后再次检测大鼠L1段脊髓血流量10 min。随后,电针组大鼠进行电针治疗,时间为20min,同步记录脊髓血流量。电针后,继续检测大鼠脊髓血流量10 min。电针组每日治疗1次,14 d后,麻醉各组大鼠,暴露L1段背侧脊髓,检测脊髓血流量10 min。 1.6 运动高能的判断 术后,分别在第1、4、7、14天采用大鼠BBB评分法对各组大鼠后肢运动机能进行评定(各种运动机能正常为满分21分)。其中第1天在大鼠从麻醉状态完全清醒后开始评分。 1.7 统计分析 数据以表示,采用t-检验/LSD多重比较分析对照组与电针组差异显著性,P0.05为差异有统