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二英类环境激素多氯联苯对小鼠的毒性试验 二氯联苯是二氯英类环境激素的同系物，arocor1254是含有54%的多氯联苯同系物。本研究选择对动物具有生殖危害的典型的二噁英类环境激素Aroclor 1254为研究对象, 以小鼠为试验动物, 研究不同发育阶段小鼠接触多氯联苯对其体成熟后公鼠睾丸和附睾、母鼠子宫及卵巢的组织病理学变化, 以帮助分析Aroclor 1254对小鼠生殖毒性产生的机理。 1 材料和方法 1.1 试验动物 昆白系小鼠, 购自第四军医大学实验动物中心, 临床健康。购回后适应饲养1周后用于试验, 预试期及试验期均常规饲养管理。 1.2 伊红染液实验 多氯联苯 (Aroclor 1254) :美国Crescent Chemical Co, Inc标准品、1g/1EA、甲醛溶液、苏木素及伊红染液。 1.3 小鼠精子发生毒性试验 摄影生物显微镜、小鼠手术器械等。1.4试验程序将性成熟期小鼠、断奶期小鼠、哺乳期小鼠、妊娠 (子宫) 期小鼠按照试验阶段需要和不同体重分成小组, 将各个阶段每个小组小鼠随机分配到1/10 LD50、1/50LD50、1/250 LD50、1/1250 LD50染毒组和稀释剂对照组。1/10LD50染毒组分别于试验的0d、3d和6d腹腔注射20mg/m Aroclor 1254溶液;1/50 LD50、1/250 LD50和1/1250 LD50按同样程序分别注射4mg/ml、0.8mg/ml和0.16mg/ml的Aroclor 1254溶液;稀释剂对照组注射花生油 (0.1ml/10g b.w.) 。当各个阶段小鼠到体成熟时, 或当后代小鼠到体成熟时母鼠分批进行超排处理研究卵子发生、受精和胚胎发育毒性, 公鼠进行精子发生毒性研究。在母鼠回收胚胎时采集子宫、卵巢, 公鼠采精时采集睾丸、附睾。 1.5 组织切片的方法 以上采集的附睾集的附睾及睾丸和卵巢及子宫角直接连同编号标签包于纱布内投入福尔马林溶液中固定, 按组固定保存在另外的广口瓶中。固定结束的卵巢、子宫样本经处理后进行石蜡包埋, 连续切片, HE染色, 最后用中性树脂封片。在生物显微镜下进行各阶段接触Aroclor 1254小鼠的睾丸及附睾以及卵巢及子宫的组织病理学观察, 并与各阶段对照组切片进行对比, 选出典型组织病理学变化。 2 结果 2.1 公鼠睾丸曲精细管分布情况 (1) 性成熟期接触Aroclor 1254的公鼠, 睾丸曲精细管处于核分裂相的精原细胞较多, 各级精母细胞较多、正常, 管腔精子较多.精子大小、形态、长短不一致;部分曲精细管结构破坏, 缺少精子;有的管腔出现大量均质或颗粒状红染物质, 并夹杂有淋巴细胞及嗜中性白细胞, 相应此部分精子缺无而出现多量红染渗出物;间质细胞核浓缩, 胞浆有空泡, 核偏于细胞一侧;附睾管中精子数量较多, 管腔中夹杂精子出现淋巴细胞, 个别附睾管上皮细胞脱落。 (2) 断奶期接触Aroclor 1254的公鼠, 睾丸曲精细管处于核分裂相的精原细胞较多, 各级精母细胞较多, 但排列不整齐;大部分管腔精子较多;部分曲精细管结构破坏, 缺少精子, 管腔出现球形精子细胞;有的管腔出现大量均质或颗粒状红染物质;间质细胞可见;附睾管中除精子外, 还存在脱落上皮细胞, 且在此部分附睾管内精子稀少。 (3) 子宫期开始通过母体接触Aloclor1254的小鼠, 睾丸曲精细管处于核分裂相的精原细胞减少, 各级精母细胞稀疏, 有的曲精细管精子缺无;睾丸间质细胞较少;附睾管中少有精子。 (4) 哺乳期开始通过母体乳汁接触Aroclor 1254的公鼠, 部分曲精细管精原细胞数量较少;曲精细管处于核分裂相的精原细胞减少, 各级精母细胞稀疏, 有的曲精细管可见精子, 有的曲精细管精子缺无;可见间质细胞, 但间质细胞核浓缩, 胞浆有空泡, 核偏于细胞一侧;附睾管中精子较少。 (5) 对照组公鼠睾丸曲精细管处于核分裂相的精原细胞多, 各级精母细胞排列整齐, 曲精细管管腔有少量或多量精子;睾丸可见间质细胞;附睾管中有多量精子。 2.2 炎性组织的发育 卵巢组织病理学变化不明显。子宫腔有多少不一的淡红色分泌物;有的黏膜上皮个别细胞核深染, 有的黏膜上皮细胞核染色质减少, 甚至出现空泡状;黏膜下层组织疏松, 含有大量的嗜中性白细胞、巨噬细胞, 呈炎性水肿;黏膜下层与固有层界限不清, 充有较多散在的炎性细胞;固有层与黏膜下层有大量的成纤维细胞增生, 子宫腺受压迫出现萎缩, 呈单层扁平上皮;固有层毛细血管轻度充血, 并有散在的炎性细胞;固有层与平滑肌层组织疏松;子宫腺上皮细胞出现空泡状, 子宫腺缺少分泌物;固有层与黏膜下层组织疏松、增厚;子宫壁增厚;黏膜上皮细胞形成多量的腺管, 固有层出现多个子宫腺管, 黏膜下层深厚、出现较多的黏膜上皮