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ZBTB8A论文：ZBTB蛋白家族成员—ZBTB8A的生物学功能初 探 【中文纲要】ZBTB蛋白是C2H2型锌指蛋白家族的重要成员,作 为转录因子调节下游靶基因的转录活性,宽泛的参与基因的转录调控, 细胞增殖、分化及凋亡等生命活动。本实验室经过RT-PCR从胃癌细 胞AGS中克隆到一个ZBTB家族基因ZBTB8A（ZincfingerandBTBdomaincontaining8A）。当前未见对于ZBTB8A的文件报道,故本文对该基因展开了初步的探索。生物信息学剖析表示,ZBTB8A NM001040441）位于第1号染色体,定位在1p35.1。该基因含有 1326bp开放阅读框,编码一个由441个氨基酸组成,分子量为50KD的蛋白。SMART剖析表示ZBTB8A蛋白N端含有一个BTB构造域,C端含有两个典型的C2H2型锌指基序。同源性剖析显示该蛋白BTB构造域和多个ZBTB家族成员的BTB构造域是高度同源的。经过建立绿色荧 光蛋白交融表达载体pEGFP-ZBTB8A进行亚细胞定位剖析,结果显示 ZBTB8A定位于细胞核且呈斑点状散布。为判定ZBTB8A蛋白的不同结 构域对定位的影响,建立了一系列截短型ZBTB8A与绿色荧光蛋白融 合表达的重组质粒,转染HeLa细胞进行亚细胞定位剖析。结果显示锌 指构造域对ZBTB8A蛋白的细胞审定位起重点作用,而BTB构造域对于 ZBTB8A在细胞核内的斑点状定位是必需的。大量研究表示ZBTB蛋白 作为转录因子参与细胞内多种信号通路的转导。因此,本文首先应用 pGal45tkLuc报告载体剖析ZBTB8A的转录激活/抑制作用,数据表示 ZBTB8A是一个转录抑制因子。其次利用一系列信号通路报告载体,通 过双荧光素酶报告基因检测系统剖析ZBTB8A对AP1,NFAT,MYC,Rb, HSE,CRE,AP1（PMA）,GRE和NF-κB有关信号通路的转录调控作用。结果表示ZBTB8A蛋白显然抑制CRE的转录活性,且该抑制作用拥有剂量依靠性。进一步对ZBTB8A的不同功能区段的转录调控作用进行剖析,数据表示BTB构造域及锌指构造域在ZBTB8A对CRE的转录抑制中都是特别重要的,缺失其中任一构造域都会显著降低该抑制作 用。pCRE-Luc质粒含有CRE元件,用来监控CRE介导的信号通路,说 明ZBTB8A可能在CRE介导的信号通路中发挥一定的抑制作用进而调控细胞的一系列功能。为进一步展开对ZBTB8A功能的研究,我们设计并合成四个ZBTB8A扰乱载体。应用半定量PCR判定出有效的ZBTB8A 扰乱载体,并经过G418筛选获得高表达及低表达ZBTB8A的AGS稳定细胞株。本实验的有关工作为深入研究ZBTB8A在胃癌细胞AGS中的生物学作用,确定ZBTB8A在肿瘤细胞中的功能打下了基础。 【英文纲要】TheZBTBproteinswhichareimportantmember ofthezincfingerproteinfamilythatfunctionas transcriptionfactorsplayimportantrolesinvariouscellular functions,suchastranscriptionalregulation,cell proliferation,differentiationandapoptosis.Firstly,we clonedagene,namedasZBTB8AwhichisamemberofhumanZBTB family,fromgastriccancercellAGScDNAbyRT-PCR.Sincethere arenoreportsonZBTB8A,wecarryoutpreliminaryexploration onthis predict  gene.Bioinformaticsdatabaseswereitsstructureandfunction.Results  usedtoanalyzeand showedthatZBTB8A （NM001040441）genehasafullopenreadingframe（ORF）  of 1326bp,whichwaslocalizedonchromosome1p35.1.TheZBTB8A geneencodesaproteinwith441aminoacids.Themolecular weightispredictedtobe50kDa.SMARTanalysisshowedthat ZBTB8AproteincontainsaN-terminalBTB/POZdomainandtwo typicalC2H2zinc-fingermotifsthatextendtoth