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水酶法提取南瓜籽油工艺优化及其理化性质分析 0 南瓜籽油的提取 南瓜籽是南明的副产物，也是南街种子、白瓜籽和金南瓜的来源。这是葫芦岛植物的南瓜种子。南瓜籽中油脂含量丰富,作为南瓜的副产物其来源丰富,价廉易得,利用南瓜籽生产开发新的可食用油料物质极具开发潜力。迄今为止,南瓜籽油的提取方法主要有索氏提取法、超声波法、超临界流体萃取法和压榨法等,尚未见系统研究水酶法提取南瓜籽油工艺的相关报道。水酶法是近年来广泛研究的一种油脂提取新技术,是将酶制剂应用于油脂分离的方法,通过对油料种籽细胞壁的机械破碎作用和酶的降解作用提高油脂的出油率,具有出油率高、油质好、色泽浅、生产能耗低、不易造成环境污染等优点。 本研究以裸仁南瓜籽为原料,在单因素试验基础上,通过正交试验方法,对水酶法提取南瓜籽油的工艺进行了优化,以期为水酶法提取南瓜籽油规模化生产提供技术支持。 1 材料和方法 1.1 仪器、试剂和仪器 黑龙江省宝库1号裸仁南瓜籽,取自讷河市宝库研究所。 纤维素酶(25000 U/g)、酸性蛋白酶(250000 U/g),上海兰季科技发展有限公司;果胶酶(45000 U/g),美国Sigma公司;其他试剂均为分析纯。 TU-1901双光束紫外可见分光光度计,北京普析通用有限责任公司;HP1100型高效液相色谱仪,Agilent公司;GC-7A型气相色谱仪,日本岛津;FW80型高速万能粉碎机,天津市泰斯特仪器有限公司;LD4-2型离心机,北京医用离心机厂;S-25型酸度计,上海伟业仪器厂;AL104型电子天平,上海瑞亿仪器有限公司。 1.2 测试方法 1.2.1 酶解-离心萃取法 南瓜籽→破碎→缓冲液酶解→高速离心→离心液加入溶剂→混合油萃取→蒸发溶剂→油脂 生产工艺要点:将南瓜籽粉碎后过筛(粒径为0.5mm),取7.0 g物料加入一定量复合酶,再加适宜p H值的乙酸-乙酸钠缓冲溶液,控制料液比1∶3 g/m L,控制温度,酶解一定时间,将酶解后的溶液高速离心(5 000r/min)破乳,向离心液中加入56 m L正己烷溶剂提取油脂,萃取3~4次,合并萃取液,旋转蒸发出萃取溶剂,用电子分析天平称取油脂质量,根据公式计算出油率。 南瓜籽出油率(%)=(提取南瓜籽油质量/南瓜籽原料质量)×100% 1.2.2 主要成分含量 蛋白质含量:凯氏定氮法(GB/T5009.5-2003);粗脂肪含量:索氏提取法(GB/T5009.6-2003);果胶含量:咔唑比色法;纤维素含量:酸性洗涤剂法;淀粉含量:旋光法(GB5006-85) 1.2.3 酸性蛋白酶的用量 首先进行单因素试验,分别考察纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶不同用量对出油率的影响。在单因素试验的基础上,对纤维素酶用量、果胶酶用量、酸性蛋白酶用量进行三因素三水平正交试验,优化3种酶的酶用量。 1.2.4 南瓜籽油的酶解正交试验 在固定复合酶优化配比基础上,对复合酶的添加量、酶解温度、酶解时间、酶解p H值进行四因素三水平正交试验,最终得到水酶法提取南瓜籽油的优化工艺参数。 1.2.5 脂肪酸的提取 参照GB/T17376-1998动植物油脂脂肪酸甲酯制备和GB/T17377-1998动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析方法,测定水酶法提取南瓜籽油的脂肪酸组成。 气相色谱分析条件:HP-5MS型石英毛细管柱(30 mm×0.25 mm×0.25μm),柱温165℃,气化室温度220℃,检测器(flame ionization detector,FID),载气(N2)流量40 m L/min,空气为400 m L/min。进样量0.5μL,以标样的保留时间为对照,以峰面积归一法计算各脂肪酸在总脂肪酸中的含量。 1.2.6 南瓜籽油中植物哌醇含量测定 水分及挥发物含量:GB/T5528-1995;折光指数:GB/T5527-1985;色泽:GB/T5525-1985;不溶性杂质:GB/T5688-1995;相对密度:GB/T5526-1985;碘值:GB/T5532-1995;皂化值:GB/T5534-1995;酸值:GB/T5530-2005;过氧化值:GB/T5538-2005。 另外,使用磷硫铁比色法测定南瓜籽油中植物甾醇的总含量;高效液相色谱法测定南瓜籽油中的维生素E含量(GB/T5009.82-2003)。 1.3 数据处理方法 试验中的数据为3个或3个以上试验样本平均值,使用统计分析软件SPSS Statistics 16.0对数据进行分析。 2 结果与分析 2.1 淀粉所占的质量分数 通过成分测定试验,南瓜籽中的粗脂肪、蛋白质、果胶、纤维素和淀粉所占的质量分数分别为49.32%、31.42%、1.36%、1.73%和0.74%。可见裸仁南瓜籽碳水化合物含量较少,油脂和蛋白质含量较高,是一种营养价值