无创性产前诊断的外周血中胎儿游离dna和rna的发现.docxVIP

无创性产前诊断的外周血中胎儿游离dna和rna的发现 产前诊断方法包括羊膜腔穿刺和背痛，对母儿都有一定的风险。超声诊断可以识别胎儿畸形，但在胎儿染色体异常的诊断中有有限的限制，只能起到辅助诊断的作用。所以人们一直在探求无创性产前诊断的方法。孕妇外周血中胎儿游离DNA和RNA的发现为无创性产前诊断提供了一条新途径。本文就孕妇外周血中胎儿游离DNA、RNA在无创性产前诊断中的研究进展作一综述。 1. 孕妇是通过出血来避免的 (1) 变迁带着于新生儿的y染色体dna 胎盘滋养层细胞与恶性肿瘤细胞的生物学特性极为相似, 均有侵入性和致癌基因的表达。受肿瘤患者外周血中存在肿瘤DNA的启发, Lo等于1997年从一孕男胎的孕妇血浆中成功扩增出特异性Y染色体DNA序列, 首次证实了孕妇血浆中存在胎儿游离DNA, 从而建立了一种从非细胞成分中快速检测胎儿DNA的方法。这一发现使非侵入性产前诊断进入了一个新的时期。 (2) 提取胎儿中游离dna的诊断依据 Lo等检测到在孕早期和晚期, 胎儿游离DNA分别占母体血浆总DNA浓度的3.4%和6.2%, 分别为母血中胎儿细胞DNA的970倍和775倍, 为从孕妇血浆中提取胎儿游离DNA进行产前基因诊断提供了依据。 Chan等对胎儿DNA进行分子学特征研究, 发现妊娠妇女的血浆DNA比未孕者的长度明显增加, 妊娠妇女血浆中的胎源性DNA比母源性DNA的分子长度短很多。这种妊娠后母源性血浆DNA分子片段长度增加而胎源性DNA分子片段较小的现象, 使从母体血浆中提取分离胎儿DNA更加容易便捷。 (3) 胎儿游离dna的检测 孕妇外周血中胎儿游离DNA的清除速率关系到下次妊娠时所进行的产前诊断是否受到上次妊娠的影响。Lo等对20例曾有生育史而此次进行体外受精 (IVF) 的妇女进行SRY基因特异性序列的连续检测, 发现在12例孕男胎的妇女血清中最早7周时出现SRY基因片段, 并且在胚胎植入至确定妊娠这段时间内进行的连续SRY基因检测均为阴性, 最后总体的研究结果显示胎儿游离DNA的浓度随着孕周的增加而增加, 不存在上次妊娠遗留下的胎儿游离DNA对本次妊娠的影响, 可以用于产前诊断。 Lo等对8例孕男胎的妇女在产时、产后立即、产后数h及数天取其外周血样进行连续检测SRY基因浓度, 发现大部分孕妇产后2h已检测不到, 估计胎儿游离DNA的半衰期为16.3min, 进一步肯定了胎儿游离DNA在无创性产前诊断中应用的可行性。 (4) 胎儿游离dna的浓度 孕妇外周血中胎儿游离DNA的存在已被证实, 但其来源及释放机制尚未完全阐明。对于其来源目前有三种解释:①母血中的胎儿细胞凋亡后释放入母血。②来源于凋亡及损伤的滋养层细胞。先兆子痫的患者由于胎盘浅着床导致滋养细胞缺氧损伤, 进而诱发滋养细胞凋亡增加, 因此先兆子痫患者血浆中胎儿游离DNA浓度明显增加可以验证这一机制。③来源于妇婴转运。羊水中胎儿DNA的浓度远高于孕妇血浆中的浓度, 这种浓度梯度使得DNA分子可能通过胎盘和胎膜直接转运。但无论哪一种机制均有待进一步证实和阐明。 (5) dna甲基化的适用范围 胎儿游离DNA在产前诊断应用中的研究主要集中在对孕男胎的孕妇血浆中Y染色体特异性DNA片段的检测, 因受胎儿性别限制, 只适用于50%的孕妇, 不具普遍性。利用母儿DNA甲基化的差异有可能突破这一局限。DNA甲基化作为表遗传机制之一, 在肿瘤发生发展的研究中占有重要地位。基于母体内的胎儿与肿瘤具有相似的生物学特征, Poon等利用表遗传标记物来特异性检测母血浆中的胎儿DNA, 取得很好的结果, 标志着胎儿DNA在无创性产前诊断中的进一步应用。 x-y-pcr检测 通过检测孕妇血浆中胎儿DNA确定胎儿性别, 可为进一步诊断胎儿是否患有性连锁遗传性疾病提供依据。Tungwiwat等运用巢式PCR技术在孕男胎和女胎的母体血浆中分别只检测到Y染色体上的SRY和X染色体上的ATL1基因序列, 敏感性和特异性均达100%。在已发现的X连锁隐性遗传病中, 血友病和进行性肌营养不良是较常见的, 此病只有男性发病。通过对孕妇血浆中胎儿SRY基因的检测可以在孕早期对胎儿性别作出正确诊断, 这样只需对孕男胎者继续做进一步的创伤性产前基因诊断。 对抗感疾病的治疗 RhD阴性妇女在孕RhD阳性胎儿时, 可因RhD血型不合而导致新生儿溶血、核黄疸等甚至死亡, 对孕RhD阳性胎儿的RhD阴性妇女行孕期RhD免疫球蛋白治疗可避免该疾病的发生。Rijnders等采用QT-PCR法检测孕妇血浆中胎儿RhD基因的类型, 敏感性接近100%, 特异性为97%, 可以用于新生儿溶血病的无创性产前诊断, 使RhD阴性的胎儿免于进行不必要的主动免疫治疗, 而使RhD阳性的胎儿能够及早获得主动免疫治疗或终止妊娠