生肌玉红膏对深度烧伤大鼠创面组织中型和型胶原表达的影响.docxVIP

生肌玉红膏对深度烧伤大鼠创面组织中型和型胶原表达的影响 生肌玉红膏最早出现在明代的陈志功修复工程中。它由当归、白芷、紫草、血毒、甘草、轻粉、白蜡树和芝麻组成。主要治疗所有伤口伤口、伤口、伤口等。生肌玉红膏临床用于治疗Ⅰ、Ⅱ度烧伤患者可显著促进创面愈合, 缩短病程, 但对其作用机制研究尚不多见。本研究拟通过动态观察生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤大鼠创面Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响, 初步探讨其促进烧伤创面愈合的作用机制, 以期为该药膏临床治疗烧伤提供理论依据和应用指导。 1 材料表面 1.1 动物许可证号 SPF级Wistar雄性大鼠, 体重 (200±20) g, 由甘肃中医学院SPF级动物实验中心提供, 动物许可证号:SCXK (甘) 2004-0006。 1.2 甘药：甘药 生肌玉红膏:甘肃中医学院附属医院药剂科提供, 甘药制字204010879;美宝湿润烧伤膏:汕头市美宝制药有限公司生产, 批号 1.3 大鼠型、型抑制剂研究 硫化钠:天津市百世化工有限公司;DAB显色试剂盒、SABC免疫组化试剂盒、抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原多克隆抗体 (工作浓度1:100) 、多聚赖氨酸防脱片剂:均为武汉博士德生物工程有限公司产品。Vanox型光学显微镜:Olympus公司;QPJ-1G型石蜡切片机:天津爱华。 2 方法 2.1 小组 2.2 小鼠格氏原螯虾的皮肤损伤皮肤型 大鼠适应环境1周后隔夜禁食, 8%硫化钠溶液大鼠背部脱毛, 进行烧伤模型的制备。以250毫升玻璃瓶装适量蒸馏水, 置于垫有石棉网的铁架台上, 石棉网下置酒精灯, 将水煮沸, 玻璃瓶盖上开一1.5cm×1.5cm口。实验前大鼠禁食12小时, 将麻醉好的大鼠已脱毛的背部皮肤置于蒸馏水已沸腾的瓶口, 注意将大鼠皮肤紧贴瓶口以密封, 避免水蒸汽泄漏, 以秒表计时, 各组小鼠烫8秒钟 (病理切片证实为深Ⅱ度) 。烧伤2小时后用生理盐水清洗小鼠背部创面, 开始于创面均匀涂药。烧伤模型组给予生理盐水, 湿润烧伤膏组给予湿润烧伤膏, 生肌玉红膏组给予生肌玉红膏, 药物完全覆盖创面, 每日定时换药1次, 连续给药直至创面痊愈。 2.3 观察指标和测试 2.3.1 动物皮的制备 于烧伤后第7、14、21天3个时间点观察, 每组每个观测点对6只动物取材。具体方法:用3%戊巴比妥钠按30mg·kg-1剂量腹腔注射麻醉大鼠, 用剪刀剪取动物创面全皮。组织经4%多聚甲醛固定, 梯度酒精脱水, 二甲苯浸透和石蜡包埋, 切片。 严格按SABC法规范操作。显微镜下观察, 背景呈紫蓝色, 阳性产物呈棕黄色或黄色, 用PBS代替一抗做阴性对照, 用Olympus光学显微镜观察创面中Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态和数量变化, 并在创面中心随机选取5个视野, 于400倍镜下用Image-pro-plus图像分析系统分析软件, 测定胶原纤维的阳性面积, 取其平均值。 2.3.2 伤口愈合 2.3.2. 1伤口愈合时间 2.3.2. 创形率的计算 各组 (余下6只动物) 均于烧伤后第1、7、14、21、28、35天分别采用先将创面边缘描绘在透明薄膜上, 再以此为模板, 将质地均匀的硬纸板剪成同样大小, 以硬纸板的重量间接地表各示创面面积大小, 按下列公式计算创面愈合率。愈合率= (原始创面面积-未愈合创面面积) /原始创面面积×100%. 2.4 统计方法 3 结果 3.1 各组大鼠深度烧伤伤口的ii型和iii型胶原的发现 结果见表1。 3.2 各组大鼠伤口愈合情况 3.2.1 创伤时长情况 与模型组相比, 生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组动物创面愈合时间缩短, 差异具有统计学差异 (P0.05) 。生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组动物创面愈合时间相比, 差异无统计学意义, 结果见表2。 3.2.2 各组患儿面内各时间点创伤率的比较 烧伤后第1天未观察到创面愈合, 故除去第1天的数据。在此后各时间点生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组的创面愈合率均高于模型组, 差异有统计学意义 (P0.05) 。生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组比较无明显差异, 结果见表3。 4 润烧玉红膏对损伤的影响 生肌玉红膏是用于各种创面及溃疡面的外用膏剂, 是中医外治经典理论“祛腐生肌”的代表方药, 具有活血解毒、润肤生肌功效。方中以当归、白芷为主药, 行气散血、活血消肿;配紫草凉血活血、除湿生肌;血竭散瘀敛疮、生肌止痛;轻粉化腐提毒, 收湿敛疮;甘草泻火解毒, 助生新肌, 调和诸药。临床长期用于烧伤创面治疗, 疗效较好, 但缺乏针对其作用机制的实验研究。本实验通过观察生肌玉红膏对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合时间、愈合率及相关胶原代谢的影响, 初步探讨其促进皮肤烧伤创面愈合的作用及其机理, 为今后该药膏的临床使用提供理论依据。 本实验结果显示, 与模型组比较, 生肌玉红膏组创面