蛛网膜下腔出血脑血管痉挛模型的制作.docxVIP

蛛网膜下腔出血脑血管痉挛模型的制作 脑血管痉挛（cp）是动脉破裂蛛网膜下腔出血的主要导致和死亡原因。为了研究其发病机制和治疗方法，我们采用了腰椎穿刺枕池血液注入两次血液的方法，成功制作了猪后肢希思唤醒延迟的动物模型。这是报告的。 带血管透射电镜sah模型 家猪12头,体重10～12 kg,雌雄不限,随机分成SAH组和对照组,每组6头,SAH组平均体重10.9 kg,对照组为11.1 kg。 SAH模型制作用阿托品0.5 mg/头,肌肉注射后,采用2.5%硫喷妥钠40 mg·kg-1腹腔注射麻醉,不行气管插管,密切观察呼吸脉搏变化;侧卧位腰骶部备皮消毒铺巾,选择腰骶交界处椎间隙为穿刺点,用16号穿刺针穿刺脊髓蛛网膜下腔。有脑脊液(Cerebrospinal Fluid, CSF)流出后,经穿刺针芯置入长75 cm、直径1 mm带导丝之硬脊膜麻醉导管(侧孔型,上海医用诊察仪器厂生产),透视下将导管头端送过C1进入枕大池。退出导丝有清亮CSF流出,证实置管成功,导管外端接专用接口,缝合固定于皮肤上备用。动物改俯卧位,放出约2 mL CSF,头低30°,SAH组抽取6 mL自体动脉血,经导管在1～2 min内注入,用0.5 mL生理盐水冲洗保持导管通畅,导管和接口用无菌贴膜严密包扎,20 min后将动物送回正常饲养,2 d后再抽取6 mL血液,注入枕大池,制成SAH模型;对照组同法置管,注入等量的生理盐水。两组各有3头在首次脑血管造影前置管,3头在首次造影后。 脑血管痉挛指标测定①数字减影血管造影(Digital Subtraction Angiography, DSA):麻醉方法同前,仰卧四肢固定,常规消毒铺巾;切开皮肤暴露股动脉,采用Seldinger穿刺置入5F留置鞘。抽血送血气分析后,将5F Hunterhead导管选择送入颈内动脉(Internal Carotid Artery, ICA)近颅底处;用1.20 mm铜丝作为计量参照,选择正位像摄片,球管距离100 cm,造影剂为60%泛影葡胺,剂量5 mL,注射速度2.5 mL·s-1,压力13.3 kPa,拍摄速度2帧/s。造影时间在模型制作前及2次注血或注入生理盐水后7 d,即第9 d。两侧ICA颅内段和基底动脉(Basilar Artery, BA)直径,用UTHSCSA Imagetool (2.0版)图形处理软件测量。②脑血管光学显微镜观察:2次造影后,开胸切开上腔静脉,18号穿刺针穿刺左心室,先用1 000 mL肝素生理盐水(25 IU·mL-1)灌洗,再用2% 戊二醛磷酸盐缓冲液(pH 7.4)500 mL灌洗固定后,立即开颅取脑,手术显微镜下分离切取BA置于10%甲醛液中固定2 h以上;经石蜡包埋切片,苏木素伊红染色在显微镜下观察。③脑血管透射电镜检查:灌洗固定分离血管方法同上,切取1 mm BA组织块,用2.5%戊二醛磷酸缓冲液固定2 h,经洗液漂洗后,1%锇酸固定2～3 h,再递增浓度乙醇丙酮脱水;样品经浸透后,用环氧树脂618包埋,并在烤箱内聚合;包块用LKB-Ⅰ型超薄切片机切片,枸橼酸铅和醋酸铀双重染色,JEM-1200EX透射电镜观察、拍片。 CSF中氧合血红蛋白(Oxyhemoglobin, Oxy Hb)测定SAH组分别于2次注血后2,4,6,7 d,常规消毒经导管取CSF 0.5 mL,2 700 r/min,离心3 min,分光光度计测定CSF A540、A560、A576值,用如下公式计算含量:[Oxy Hb]=(1.4747A576-0.682A560-0.5329A540)×10-4。 统计学分析两组间生理指标用成组比较t检验;注血前后动脉直径用配对资料的t检验。 小鼠脑底和脑底组织病理学检查 1.两组动物间体重差异无显著性(P0.05);腰椎穿刺置管、注血或注生理盐水后当天动物清醒,第2天自主进食,四肢活动良好,两便正常;两组动物血气分析均正常。 2.DSA:对照组实验前后血管直径无变化(P0.05);SAH组右颈内动脉(Right ICA, RICA)、左颈动脉(Left ICA, LICA)和BA直径,实验前后有显著性差异(P值分别为P0.01,P0.01和P0.01),痉挛明显,具体测量结果见表1,造影片如图1所示。 3.BA显微镜和透射电镜检查:对照组未见异常;SAH组脑底表面有含铁血黄素沉着和血凝块存在,BA皆有内膜增生、内褶、弹力层断裂等病理改变,如图2、3所示。 4.CSF中Oxy Hb测定:2次注血后2,4,6,7 d,Oxy Hb含量分别为(0.069 5±0.015 9)×10-4mol·L-1,(0.173 8±0.006 0)×10-4mol·L-1,(0.243 1±0.043 7)×10-4mol·L-1