亚洲玉米螟卵内保幼激素酯酶活力与选股激素滴度的变化.docx

亚洲玉米螟卵内保幼激素酯酶活力与选股激素滴度的变化 寄生虫与收养之间的关系研究由来已久。近年来,为了探讨寄生蜂寄生后对寄主的调控作用及寄生蜂自身的生长发育特性,一些研究者对寄生蜂寄生后,寄主体内保幼激素(juvenile hormone,JH)滴度、保幼激素酯酶(juvenile hormone esterase,JHE)活力及蜕皮激素(molting hormone,MH)滴度的变化着手进行研究,并已获得一定研究成果。但研究对象多为幼虫与卵—幼虫—蛹跨期寄生蜂,迄今为止尚未见到赤眼蜂这类卵寄生蜂的研究报道。本研究对玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniaePang et Chen)寄生与未寄生的亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalisGuenee)卵内保幼激素酯酶活力(以此反映保幼激素滴度)和蜕皮激素滴度的变化进行了测定,以期通过测定结果说明赤眼蜂寄生后对寄主卵发育的调控作用。 1 材料和方法 1.1 人工饲料的配制 玉米螟赤眼蜂(T.ostriniae)引自华南农业大学,用米蛾(Corcyra cephaloniaStainton)卵繁殖,置于15L∶9D、(25±1)℃、RH为80%左右的光照培养箱中饲养。试验中所用的赤眼蜂为一日龄雌蜂。亚洲玉米螟(O.furnacalis)引自中国农业科学院植物保护研究所,参照周大荣等的方法,在室内用人工饲料饲养。试验中所用的卵块为产后当日的卵块。 1.2 测试方法 1.2.1 未寄生虫卵样同时取样 取当日的卵块大量接蜂。3 h后去除赤眼蜂,被寄生的卵块分别在0,12,24,36,48,60,72,84,96,108,120,144,168 h取样;所设对照(未寄生卵)同时取样。因96 h后亚洲玉米螟卵已孵化,故仅在0至96 h取样。所取样品卵与对照卵立即置于液氮罐中保存。 1.2.2 放射性活度测定 JHE活力测定采用放射化学法(RC)。按每mL缓冲液60 mg卵块的比例,用0.1 mol·L-1的磷酸缓冲液(pH 7.0)进行卵块的冰浴匀浆,超声波破碎5 min后静置过夜,离心制备待测液。将待测液加入稀释后的3H?JHⅠ标样溶液中。经(29±1)℃温浴30 min后用碱性甲醇溶液中止反应。涡旋振荡后加入异辛烷振荡萃取10 min,4 000 r·min-1离心15 min。取上清液和下层液各50 μL置于闪烁瓶中,加入5 mL亲水型闪烁液,用Beckman LS 9800型液体闪烁计数器以H数法校准测定放射性活度(Bq)。所用试剂:3H?JHⅠ(10C)由美国杜邦原子能研究所合成(中国科学院动物研究所提供),放射性比活度为444.0 GBq·mmol-1,用异辛烷稀释后使用。异辛烷为国产分析纯试剂;磷酸缓冲液,碱性甲醇,亲水型闪烁液(PPO 5 g,POPOP 0.5 g,二甲苯665 mL,Triton X 100 335 mL)中除Triton X 100为Amresco进口分装外,其余均由国产分析纯试剂配制。测定重复3次。 1.2.3 放射性强度的测定 MH滴度测定采用放射免疫法(RIA)。将20 mg卵块放入1.5 mL 70%(体积分数)的甲醇溶液中匀浆,匀浆液4 000 r·min-1离心10 min。吸取上清液后,沉淀物用一定量的70%甲醇溶液再抽提一次。合并两次抽提液,70 ℃水浴,N2流下蒸干。加一定量GPBS溶解蒸干物,供RIA用。RIA的测定与计算参照曹梅讯的方法。用北京核仪器厂生产的FT 613自动计算125I放免测量仪测定放射性强度。所用试剂:RIA测定用20羟基蜕皮酮免疫盒由中国科学院上海昆虫研究所(现植物生理生态研究所)提供;GPBS等均由国产分析纯试剂配制。测定重复2次。 2 结果与分析 2.1 寄生虫卵内jhe活力特征 从图1可以看出,寄生卵与未寄生卵内JHE活力(以JH降解率表示)呈现不同的变化。寄生卵初期JHE活力即出现高峰,其活力为对照的3倍左右。以后逐渐下降,至36~48 h活力至最?低?点,随?后 60 h又出现1个高峰,72 h为1个低谷,84 h后寄生卵内JHE的活力变化较缓,至120 h再次出现高峰,后又缓慢下降,直至玉米螟赤眼蜂羽化。3个JHE活力高峰中,以寄生初期为最高。因保幼激素酯酶活力变化与保幼激素滴度变化呈现较明显的负相关关系,由此可以推断寄生卵内JH滴度的变化为:36~48 h左右JH滴度出现1个高峰;72 h后又出现1个高峰;以后逐渐下降,至120 h后略有回升,保持较低的JH滴度至赤眼蜂羽化。 2.2 mh滴度变化 图2的结果显示,寄生卵与未寄生卵内MH的滴度也呈现不同的变化,初期,两者MH滴度接近,6 h后寄生卵内MH滴度出现低谷,以后渐渐上升,至18 h出现1个高峰;此后缓慢下降,至3