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几种中药中药抗dna损伤的实验研究 人参、黄原、当归和枸杞是补充剂，可以补充人体物质，增强机械功能，提高身体抗病能力，消除虚弱和综合征。现代研究表明，这些药物具有延迟衰老的作用。在本研究中，以大鼠腿骨细胞微核（mn）和姐妹染色单体交换（sce）为指标，研究了人参、黄原、当归、枸杞抗环磷酰胺（cpp）引起的dna损伤效果。探索延迟衰老的机制。现将研究结果报道如下: 1 药物、药剂与仪器 实验动物 ICR小鼠, 体重20～22g, 雌雄各半, 由南京中医药大学实验动物中心提供。 试 剂 环磷酰胺 (CPP) 由上海华联制药公司生产, 秋水仙素由上海化工试剂厂生产, 药用活性碳由武汉市凌云化工厂生产。 药物制备 人参、黄芪、当归、枸杞子购于南京市药材公司, 均经鉴定符合《中华人民共和国药典》规定。药液制备:称取适量的供试药物, 加入适量的去离子水浸泡2小时后文火煮沸30分钟, 滤出头煎, 药渣再加入适量的水, 再煎沸20分钟, 滤出二煎与头煎合并, 浓缩至一定体积 (ml) , 计算出折合含药量 (g/ml) 。冷藏备用。人参、黄芪、当归、枸杞子四种药液的终浓度分别为0.10g/ml, 0.15g/ml, 0.10g/ml及0.12g/ml。 2 活性物质的提取 微核 (MN) 实验方法 ICR小鼠, 随机分组, 分为正常动物组、CPP致损组、中药组, 每组各5只。中药组按剂量要求, 每天每只灌0.25ml药液, 连续灌胃10天;正常动物组及CPP致损组灌服等量蒸馏水。CPP致损组及中药各组动物于第9天灌胃后, 腹腔注射CPP;正常动物注射等量生理盐水。第二天进行实验。 MN制片:中药组与致损组CPP量为40mg/kg, 脱臼处死动物, 取骨髓细胞置生理盐水中, 离心 (1000rpm) 去上清液, 加37℃预温的0.4%KCL 3ml, 置37℃下8分钟, 加固定液 (甲醇∶冰醋酸=3∶1) 1ml固定, 离心5分钟, 去上清液, 再加入固定液3ml混匀, 固定2次后气干法滴片, Giemsa (1∶10, pH6.4) 染色10分钟。每个标本高倍镜下观察1000个细胞, 计算出微核率, 进行统计学分析处理。 SCE实验方法 前期处理与MN实验方法相同, 中药组与致损组CPP为20mg/kg。在处死前24小时, 每只鼠腹腔注射活性炭吸附的5-Brdu (30mg/只) 。处死前4小时, 腹腔注射秋水仙素 (5mg/kg) 。 按常规法制备SCE片, 片子在37℃温箱中老化2天后进行紫外线照射分化, Giemsa染色, 每组标本油镜下观察中期分裂相细胞100个, 按Lamber法计数细胞中的SCE数, 结果用t检验处理分析。 3 cpp致小鼠骨髓细胞mn及sce频率的检测 人参、黄芪、当归、枸杞子对CPP所致小鼠骨髓细胞MN增高的影响。实验结果见表1。 由表1可见, CPP致损组的小鼠骨髓细胞MN率明显高于正常动物组 (P0.05) , 说明CPP致DNA损伤作用较明显;人参、黄芪、当归、枸杞子则能明显抑制CPP所致小鼠骨髓细胞MN率的增高 (P0.05) , 表明这几种药具有较好的抗DNA损伤作用。 人参、黄芪、当归、枸杞子对CPP所致小鼠骨髓细胞SCE频率增高的影响。实验结果见表2。 由表2可见, CPP致损组小鼠骨髓细胞SCE频率明显高于正常动物组 (P0.05) , 说明CPP致DNA损伤作用明显;CPP致损组与人参、黄芪、当归、枸杞子等实验组比较也有显著的差异 (P0.05) , 表明这几种药能明显抑制CPP所致小鼠骨髓细胞SCE频率增高。 4 提高机体抗dna损伤能力 现代研究表明:机体DNA损伤和对DNA损伤修复能力的减弱与衰老有关, 提高机体抗DNA损伤能力或提高机体DNA损伤修复能力将延缓衰老的进程。在衰老研究中, 许多学者也证实, 提高机体抗DNA损伤能力和提高DNA损伤修复能力均能降低MN及SCE频率。 DNA分子的完整正确决定着机体生命活动的盛衰。DNA分子受损, 可表现为光镜下可见的细胞MN率和SCE频率的增高。目前普遍认为MN和SCE是反映染色体和DNA遗传物质损伤的敏感指标。 本实验以小鼠活体骨髓细胞微核 (MN) 和姐妹染色单体互换 (SCE) 为检测指标, 对人参、黄芪、当归、枸杞子进行研究, 发现这几种中药能拮抗环磷酰胺造成的DNA损伤, 该结果为这些药物的抗衰老机理研究提供了线索。