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刺槐根瘤形成过程中传递细胞功能的初步研究 近年来，人们对传承细胞的分布和发育进行了广泛的研究。但对于传递细胞的确切功能还没有积累很多确实可信的资料, 对于传递细胞在植物体内的作用基本上是根据其形态特征和在植物体内所处的位置等推理出来的。因此, 作者在对刺槐根瘤形成过程中根外层传递细胞的发生部位以及发育过程详细研究的基础上, 进一步对传递细胞的功能进行了初步研究和探讨, 以便为以后更深入的研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 刺槐根瘤菌种和培养基 刺槐家系种子 (6号) :由山东省林科所提供。菌种:从刺槐根瘤分离获得的菌株87—1—1。培养基:刺槐根瘤菌种采用YEMA培养基;刺槐苗采用NF溶液培养基。 1.2 方法 1.2.1 种子保鲜催芽 选取饱满的刺槐种子, 经70%的酒精处理30～60 s和0.1%的升汞表面灭菌5 min后, 于50～60℃温水中浸种, 待种子吸胀后移入滤纸卷筒烧杯中, 于25℃温箱中催芽。待胚根长至3～5 cm时浸根接菌, 然后分别移到盛有NF培养液的培养瓶中, 置于25℃培养室中在2 000 lx下每日光照12～14 h。 1.2.2 刺槐幼苗干重测定 采用烘干法。将培养4 d、8 d、12 d、16 d、20 d的刺槐加菌幼苗从培养瓶中各取5株, 设3个重复, 分别用吸水纸吸干植株表面的水分, 称其鲜重;随后置于红外烘箱中干燥30～45 min, 取出冷却0.5 h, 称量后再次放入烘箱中30 min, 冷却后称量直至恒重, 记录其干重。以培养相应天数的无菌刺槐幼苗作对照。 含水率的计算公式为:含水率= (g1-g2) /g1×100%, 其中:g1为样品的鲜重,g2为样品的干重。 1.2.3 刺槐无菌苗的培养 采用硝酸-高氯酸 (5∶1) 消煮法。分别取培养7 d、15 d、20 d后的刺槐根段的烘干磨碎样品0.5 g (精确到0.000 1 g) , 置于洗净的锥形瓶中, 加混合酸25 ml于盛样锥形瓶中, 不要摇动锥形瓶, 瓶口放一小漏斗, 消煮时可减少蒸发, 并置于通风橱中过夜。第2天将调温电热板温度调高, 使消煮液保持微沸, 此时发生大量二氧化氮棕色气体。当棕色气体不再发生时, 取出盛样锥形瓶, 定容至25 ml, 同时做两个试剂空白试验, 以校正试剂误差。以培养相同时期的刺槐无菌苗作对照。采用ICP (电感耦合等离子体发射光谱仪) 测定。 2 结果与分析 2.1 接种根瘤菌对刺槐幼苗含水率的影响 从表1可以看出, 接种根瘤菌的刺槐幼苗其鲜重、干重均高于同期培养的未接菌的刺槐苗。未接种根瘤菌的刺槐幼苗含水率略低于同期接种根瘤菌的刺槐幼苗的含水率, 但差异不明显。随着培养天数的增加, 刺槐幼苗含水率变化不大。接种根瘤菌的刺槐幼苗在培养第20天时含水率达到最大, 为92.47%;而未接种根瘤菌的刺槐幼苗在培养16d时达到最大, 为91.93%。这可能与培养初期接种根瘤菌的刺槐幼苗根表皮传递细胞加速水分的运输有关。培养16 d之后, 由于根瘤和传递细胞的共同作用, 含水率继续增加。 2.2 接种根瘤菌刺槐幼苗铁元素含量 对根瘤形成过程中水培刺槐苗根段作元素分析, 结果见表2。同一时期接种根瘤菌的刺槐幼苗根段各元素含量均高于未接菌的对照刺槐苗。其中在培养第7天后, 接菌刺槐苗根段的锰元素含量明显高于对照, 其增加率为43.48%;培养至第15天, 接菌刺槐苗根段铁元素的含量大大提高, 比对照增加94.29%;而培养至第20天, 接菌刺槐苗根部铁元素的含量仍比对照高58.21%。 在幼苗生长过程中, 刺槐幼苗根部大量元素钾的含量明显多于大量元素磷、镁的含量;而微量元素铁、锌的含量大于元素锰。随着培养天数的增加, 刺槐根段元素的含量逐渐加大, 其中接种根瘤菌的刺槐苗根部磷、钾、镁的含量分别从第7天的28.00、52.00、4.14 mg/g增加到第20天的35.60、59.50、6.39 mg/g;其微量元素铁、锰、锌的含量分别从第7天的0.38、0.33、0.33 mg/g增加到第20天的1.06、0.56、1.38 mg/g。而未接根瘤菌的刺槐苗根部元素在培养期间其增长量要明显小于接菌的刺槐苗。 3 植物根瘤的吸收元素 (1) 根瘤形成过程中, 接种根瘤菌的刺槐幼苗含水率稍大于对照, 但差异不明显。这可能是由于溶液培养方式对刺槐苗有较大的影响, 根系吸水又主要是因为蒸腾作用引起的被动过程, 所以对照与接种根瘤菌的差异较小。 (2) 根瘤菌与豆科植物共生作用的形成涉及到根瘤菌与豆科植物的相互作用, 也涉及到细胞表面的运输系统。有资料显示, 豆科植物R.leguminosarumcv.Viciae的一类变种必须从培养基中吸收铁离子后才能结瘤, 固氮酶中钼铁辅因子也需要铁, 否则, 固氮所需的豆血红