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中华真地鳖卵块质量评估 真地龟子和假地唑酮是《中华人民共和国药典》记载的优质药物。以雌虫全体入药,是中医常用的活血化淤,接骨补筋、消肿止痛类药材。近年来,人们对地鳖虫的生物学特性、化学成分及药理作用进行了研究[2~5],显示出重要的经济和药用价值,具有产业化饲养的良好前景。但在规模化养殖和大量引种过程中也存在诸多问题,特别是雌虫产卵周期和卵块质量及发育过程等生物学特性不清楚,严重影响规模化饲养。作者针对以上问题,进行了相关试验,结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 成虫的放养和饲养 中华真地鳖虫源由安徽亳州兴邦科技发展有限公司提供,在安徽农业大学植物保护学院养虫室内饲养。人工饲料配方参考王林瑶等。在若虫羽化高峰期,挑选附肢齐全、虫体有光泽、行为活泼的刚羽化雌成虫120头,分A、B、C的3个重复,将试虫放置到直径约40cm、深度约15 cm饲养盒中,加入含水量为15%的饲养土(经高温灭菌),厚度约7 cm。再向每个处理中投入行为活泼雄成虫10头,且定期向饲养池中补入雄虫,使雌虫可充分交配。每次喂食要求有剩余,保证足够的食料供取食。1个月后,对饲养盆进行筛卵,记录卵鞘个数,置于干土中保存。同时记载雌虫的成活情况。以后每月筛卵统计1次,连续调查5个月。 1.2 卵发育试验的建立和研究 1.2.1 卵块的预处理 从干土中保存的卵块中抽取333粒,进行好、中、差3个等级质量分级,对每等级设3个重复。描述不同质量卵鞘的形态学特征,并称重。卵块用4%甲醛漂洗、晾干后,与含水量为15%的饲养土(经高温灭菌)搅拌混合,分别放入培养皿,置于温度为30℃、相对湿度95%的恒温培养箱中。从第1粒卵块孵化起,每天记载卵的孵化情况,连续记录40 d,若仍未孵化,则认为卵块不能孵化。统计卵块出虫数和孵化率。再从饲养池中挑选较典型各品级的卵块,置于ORIENT型解剖镜下拍照。 1.2.2 卵块孵化和发育 从饲养池中大量收集腹部挂卵块的雌成虫放入另一盆中饲养,第2 d上午8点过筛,确卵鞘前1 d为产卵日期。依据分级指标挑选最好的卵块200粒,卵块孵化方法和条件同上。以后每5 d随机选5颗卵块,在ORIENT型解剖镜下剥查,记录下卵鞘、卵粒孵化期的形态变化。并记录卵块的孵化情况,划分卵发育分级标准。同样方法对各发育等级的卵粒拍照。 1.3 方差分析及差异显著性检验 (1)对各月龄雌虫产卵数(各月龄雌虫产卵数=当月的卵块数当月雌虫数)进行方差分析及差异显著性检验。 (2)对不同质量的卵块出虫数及孵化率进行方差分析及差异显著性检验。 以上所有数据以平均值±标准差表示,应用DPS数据处理系统,进行Duncan新复极差法检验处理间的差异显著水平。 2 结果与分析 2.1 月产卵及产卵周期测定结果 中华真地鳖雌成虫在各月龄产卵情况见表1。可知1月龄和2月龄雌虫产卵数相近,每月约产5颗至6颗左右,2龄段间无显著差异。3月龄雌虫的产卵数有明显的提高,单个雌虫可月产卵8~9块,与1、2月龄雌虫有极显著差异。4、5月龄雌虫的产卵能力明显衰退,单个雌虫月产卵数在2块以下,与前3个龄段的产卵数均存在极显著差异。雌虫的产卵动态变化表明了中华真地鳖雌虫在交配后,卵巢迅速发育成熟,进入稳定的产卵期。到3月龄后,卵巢发育进一步成熟,达到产卵高峰期。随后卵巢开始萎缩,生殖能力下降,产卵数减少,产卵周期变长。 *表中数据平均值±标准差,数据后有不同字母表示处理间差异显著(P0.05)。 2.2 卵块及卵块酶分布 统计调查中华真地鳖卵块形态学特征,划定分级标准,将卵鞘的质量分1级、2级、3级3个品级(见封底彩插图版Ⅳ:图1)。(下图同) 1级:整体为红褐色或黑色,卵块较饱满,锯齿排布均匀、规则、无破损,外表光泽好,卵鞘壁较厚纵脊线较明显,卵块长约10 mm,宽5mm左右,表面弧度起伏不明显。迎光观察,卵粒分布不可见。卵块均重0.046 8 g。 2级:红褐色或浅红褐色,卵块大小不均匀,从外表可以看到卵粒在其内的分布。卵鞘壁较薄,锯齿排列稍较不均匀,有的已出现破损。部分卵鞘柄已缺失。卵块均重0.048 4 g。 3级:卵块畸形不饱满,浅红色或棕红色,外壳有明显的起伏,表面可以看出卵粒。有的卵块表面干瘪或破损,小齿被粘着,或锯齿排列不清。有的已被泥土包裹或卵块上有其他粘着物。卵鞘均重0.043 6 g。 2.3 不同分级的卵块孵化率及出虫数的比较表7 各品级中华真地鳖卵鞘的孵化率和卵块出虫数变化见表2,1级卵块孵化率最高,2级卵块次之、3级卵块孵化率最低,1级卵块孵化率与2级、3级卵块孵化率均存在显著差异,而2级和3级的卵块孵化率之间无显著差异性。表明中华真地鳖卵块孵化率与其性状之间有明显的关系,同时表明卵块一旦有破损,其孵化率也下降。比较各卵块孵化虫数表明:2级的卵块平均出虫数最高,1级的卵块平