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基于uplc串联q-of-msms的芪强心胶囊药效物质成分研究

珍珠港胶囊是近年来在中国首次采用经络病理论指导法制定的治疗慢性充血性心力衰竭的中药药物。这是中医药预防和治疗心血管疾病的重要创新。其组成为黄芪、附子、人参、丹参、葶苈子、泽泻、红花、玉竹、陈皮、桂枝、香加皮11味中药。方中的附子AconitiLateralisRadixPreparata是毛茛科乌头属植物乌头的干燥侧根,有毒,并具有镇痛、消炎、强心和抗癌等广泛的药理作用。在本方配伍中与黄芪共用,益气温阳而促进心功能,均为君药。二萜类生物碱是附子的主要化学成分,按取代基结构不同分为3类:单酯型生物碱、双酯型生物碱和脂型生物碱(图1),这些也有可能是芪苈强心胶囊的药效物质成分。前期对于芪苈强心胶囊的有效部位成分的研究中,并未检出附子中的二萜生物碱类成分。而二萜类生物碱是否在芪苈强心胶囊中存在,是否经过加工后仍以原形状态存在,有没有受到复方中物质的相互作用的影响,是本次研究的重要目的。本实验使用UPLC/Q-TOF-MS/MS对芪苈强心胶囊有效部位中的C19-二萜类生物碱进行了检测和鉴定,为其物质基础的研究提供有力的佐证。

1rownlespp/hlbspe小柱

ShimadzuUFLC超高效液相色谱;ABSCIEXTripleTOFTM5600质谱系统;BrownleeSPP液相柱(美国PE公司,100.0mm×2.1mm,2.7μm)。WatersOasisHLBSPE小柱(60mg)。

芪苈强心胶囊由河北以岭药业有限公司提供,批号100102。对照品乌头碱(批号110720-201111,20mg/支)购自中国食品药品检定研究院。

2方法

2.1spe萃取法

芪苈强心胶囊内容物1.2g,50%甲醇超声提取30min,提取液蒸干。取干燥样品10mg,加5mL甲醇,超声溶解后,离心,取上清液500μL,加500μL水后,过固相萃取(SPE)柱,再用90%甲醇1mL洗脱,收集流液,40℃水浴吹干,以200μL甲醇-水(50∶50)复溶,进样分析。

2.23

色谱条件:流动相:水(含0.1%三氟乙酸)(A)-甲醇(B)。体积流量0.5mL/min。进样体积10μL。梯度洗脱程序:0~2min,10%B;2~13min,10%~40%B;13~19min,40%~70%B;19~20min,70%~100%B。柱温40℃。

质谱条件:离子化模式为ESI,正、负离子扫描,毛细管电压为3.5kV,CE电压为45V,除溶剂气体为氮气(900L/h),除溶剂温度为550℃,离子源温度为120℃,质核比扫描范围m/z:50~1300,扫描模式:IDA;动态背景扣除(DBS)开启;扫描周期:1s;数据处理:PeakViewSoftwareTM数据处理软件。

3头皮碱类的鉴定

将可能的目标化合物化学式导入数据处理软件XICManager,经过精确质量数对比、离子碎片分析以及与对照品对照,鉴定了20个乌头碱类的化合物。包括6个双酯型二萜生物碱和14个单酯型二萜生物碱。结果见表1、图2。

3.1化合物鉴定结果

双酯型生物碱是未经炮制的附子中的主要成分,也是毒性成分,但是在炮制以后大部分会水解生成单酯型生物碱,毒性降为之前的1/200。

化合物13的质谱图给出646.3186的准分子离子峰,使用FomularFinder,根据二萜生物碱的一般结构限定C个数≤50、H≤200、N、O≤20,推测其可能的化学式为C34H47NO11。MS/MS谱中有m/z554.2709[M+H-AcOH-CH3OH]+,105.0332[C7H5O]+,经与乌头碱对照品对照,tR、精确相对分子质量均一致,鉴定为乌头碱。

化合物17的质谱图给出m/z632.3026的准分子离子峰,使用FomularFinder推测其可能的化学组成为C33H45NO11,MS/MS谱中有m/z572.2832[M+H-AcOH]+,540.2532[M+H-AcOH-CH3OH]+,512.2636[M+H-AcOH-CH3OH-CO]+,105.0336[C7H5O]+的碎片离子,经与文献对照鉴定为中乌头碱。

化合物19的质谱图给出m/z616.3090的准分子离子峰,使用FomularFinder推测其可能的化学组成为C33H45NO10,MS/MS谱中有m/z584.2851[M+H-CH3OH]+,556.2891[M+H-AcOH