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基于db3小波分析的浮游植物荧光识别技术研究

中国海洋恶意软件的发病率和规模都在增加，持续时间也越来越长，直接和间接经济损失也越来越大。为保护海洋生态环境,减少赤潮灾害所造成的经济损失,迫切需要发展一种能够现场、实时、准确地识别有害赤潮藻的技术。

目前常用有害赤潮藻种类和数量的分析方法有图像识别技术、色素分析技术、高效液相色谱法(HPLC)、流式细胞仪法、荧光技术。浮游植物活体荧光技术因具备灵敏、快速、易于实行现场实时测定等优点而广受欢迎。1980年代,美国研究者Yentsch等根据叶绿素/辅助色素比率(chlorophyllaccessorypigmentratio)将不同海域主要的海洋浮游植物分为4大类进行检测。Lee等据蓝藻的藻蛋白所发出的特征荧光光谱建立了现场监测活体蓝藻含量的荧光技术。Kolbowski等采用发光二极管,通过所测的叶绿素初始荧光产率成功将3个主要的藻类群体加以区分。1990年代,Beutler等利用叶绿素荧光激发光谱将浮游植物分为4类,建立起浮游植物群落组成测定技术。国内的科研工作者也在这一领域进行了大量的研究工作,2002年,张利华和张经通过研究发现,利用浮游植物细胞内所含色素的不同,通过FACScan流式细胞仪对波长488nm处的蓝光激发所产生的自发荧光进行识别;2004年,王学民等人利用图像分割、特征提取等手段,对圆筛藻和夜光藻的图像识别进行了初步研究,得到了80%以上的识别正确率;2005—2006年,刘凤军等人和王学民等人结合使用神经网络技术,对裸甲藻、赤潮异湾藻、盐藻、圆筛藻、海洋原甲藻等的荧光图像进行识别,获得了90%以上的识别正确率;姚鹏等运用HPLC分析了实验室培养的硅藻的色素,并通过特征色素的比值组合对海洋浮游硅藻的分类进行了初步研究。

近20多年来浮游植物群落调查资料表明,我国近海海域在非赤潮期间主要以1～2个门类的多种浮游植物为主,当发生赤潮时多以单相型赤潮为主,但是双相型赤潮也有增加的趋势。本实验室的张芳等人通过研究发现小波分析是1种提取浮游植物荧光特征的有效手段,通过选用coifN系列小波函数,对浮游植物门类水平上的识别进行了初步探讨。在此基础上,本文选用43种我国近海常见的赤潮藻种和优势藻种,利用db3小波和Bayes判别分析提取其三维荧光光谱的特征谱,通过系统聚类的方法建立了浮游植物门—属水平上的二级标准荧光谱库,利用多元线性回归法建立了浮游植物群落组成荧光分级识别测定技术,最终实现了在门类和属类水平上对浮游植物群落组成进行分级识别。

1材料和方法

1.1荧光计检测条件

仪器:Jobin-Yvon公司Fluorolog-3荧光光谱仪及其配套的工作站软件,1cm石英比色池;bbemoldaenke公司生产BBE荧光计。

分析条件:激发波长的扫描范围为400～650nm,发射波长的扫描范围为600～750nm,步长均为5nm;激发狭缝和发射狭缝均为5nm,扫描速度为80nm/s,信号的积分时间为0.05s;为减少噪音干扰,每个样品平行测定2次。对于两两混合的混合样品而言,叶绿素含量使用BBE藻类分析仪测定。

1.2浮游植物的测定

本文所选的43种浮游植物(见表1)均来自中国海洋大学海洋污染生态化学实验室,依照藻种的不同选用适合的培养液。采用GXZ-3100型光照培养箱培养试验藻种,设置培养箱的温度分别为20℃,25℃,光照强度分别为20000lx,12000lx,7000lx,4000lx,光暗比为12h∶12h。测浮游植物的培养周期为14d,培养体积为300mL,每个藻种平行培育2份,每隔2d从培养箱中取出适量体积的藻液样品进行测定,每份平行样平行测定2次,测完之后的藻液样品不再回收。其中每个光照取第1份平行样所测得的荧光光谱作为训练集,用于建立识别方法。取第2份平行样测得的荧光光谱作为测试集,用于所建立识别方法的验证。对于混合藻样品,将用于混合的单种藻的叶绿素浓度用BBE藻类分析仪测定后,按照叶绿素浓度比为1∶3和3∶1两两混合,每个混合样平行测定2次。

1.3小波的扩展性

Daubechies小波是有著名小波学者IngridDaubechies所创造,她发明的紧支集正交小波是小波领域的里程碑。Daubechies系列小波简写为dbN,其中N表示阶数,这个序列的小波支集长度和滤波器长度都是2N左右,消失矩为N,可见db小波族的小波扩展性比较好,可以比较灵活地权衡增加支集长度带来的边界效应问题。基于本课题的研究现状等背景,本文尝试选取db3小波对扫描得到的浮游植物荧光光谱进行分