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骨疏宁颗粒对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响

骨蜀宁颗粒是广西玉林医院的经验药物。它由蚕、狗背、骨碎补、丹参、阴阳、山茱萸、独活、牛膝、蜈蚣等中医药经过加工精制而成。具有补肾肝肾、强筋强骨的功效。本研究建立维甲酸诱导的大鼠继发性骨质疏松模型,探讨骨疏宁颗粒对大鼠骨质疏松的药理作用,为临床应用提供理论依据。

1实验材料

1.1体重、体重

6月龄SD大鼠84只,SPF级,体重250±20g,雄性。购自广西医科大学实验动物中心,合格证号:SCXK桂2003-0003。

1.2学生仙灵骨指导制剂

骨疏宁颗粒(由僵蚕、狗脊、骨碎补、丹参、淫羊藿、山茱萸、独活、牛膝、蜈蚣等组成),每克含生药量3.583g,由广西玉林市骨科医院提供,院内制剂批文号:桂药制字(2004)800034;仙灵骨葆胶囊(贵州同济堂制药有限公司,批号:060342);尼尔雌醇片(上海医药集团有限公司,批号:050831);维甲酸片(山东良福集团制药有限公司,批号:060501);碱性磷酸酶(AKP)试剂盒(法国依杰公司);无机钙试剂盒(法国依杰公司);无机磷试剂盒(法国依杰公司)。

1.3测定项目及仪器

XR-36双能X线骨密度测量仪(美国Norland公司生产),JN-2型精密扭力天平(上海第二天平仪器厂),78X-2型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂),JY6001电子天平(上海天平仪器总厂),721分光光度计(上海第三分析仪器厂),7060型自动生化分析仪(日本日立公司)。

2不同剂量的骨疏宁颗粒配制

雄性SD大鼠84只,随机分为7组:正常组,模型组,骨疏宁高、中、低剂量组,仙灵骨葆胶囊组,尼尔雌醇片组,每组12只。除正常组外,其余组均于实验第1天至第14天按70mg/kg体重的剂量灌服7%维甲酸溶液(用维甲酸片及生理盐水配成),每日1次,灌胃容量为10ml/kg体重,14天后停用维甲酸。从实验第1天至第28天骨疏宁高、中、低剂量组分别按3.2g/kg、1.6g/kg、0.8g/kg的配方颗粒剂量给药;仙灵骨葆胶囊组按0.246g/kg剂量给药(按人鼠体重换算剂量);尼尔雌醇片组按0.001g/kg剂量给药(按人鼠体重换算剂量)。使用时用蒸馏水将骨疏宁颗粒分别配成0.32g/ml、0.16g/ml、0.08g/ml混悬液,每日灌胃1次;仙灵骨葆胶囊配成0.0246g/ml,每日灌胃1次;尼尔雌醇片配成0.0001g/ml,每周灌胃1次,其余6天给予蒸馏水代替;正常组、模型组分别给予蒸馏水灌胃,每日1次。各组灌胃容量均为10ml/kg体重。各组于用药治疗28天后,禁食(不禁水)12h,称重,经1%戊巴比妥麻醉,眼眶静脉采血后处死,剖取两侧股骨。

3观察指标和方程式

3.1血清样品检测

实验动物眼眶静脉取血,分离血清,-20℃保存。用生化自动分析仪测定血清钙、磷、碱性磷酸酶的含量。

3.2股骨湿重和干重的测定

剥离大鼠右侧股骨迅速称量其湿重,然后浸入生理盐水中,-20℃保存,供测定骨密度。在120℃烘干8h,取出称量其干重。

3.3骨密度测定[x射线吸收dexa方法]

应用XR-36型双能X线骨密度仪,测定大鼠右侧股骨的骨密度。

3.4学用测定的测定

据三点弯曲实验的原理,改进骨生物力学的测定方法,用片剂四用测定仪,加载速度为12mm/min,跨距为26mm。测定右侧股骨的最大加载硬度。

3.5病理人类学检查

剥离大鼠左侧股骨迅速放入10%福尔马林固定,氯化铝法脱钙,石蜡切片,HE染色,光镜观察。

4统计方法

所有数据采用SPSS11.0统计软件包进行统计分析,各组样本均数比较采用F检验。

5结果

5.1骨疏宁对大鼠体重的影响

实验前各组体重比较差别无统计学意义(F=1.5719,P0.05);实验后各组动物体重比较差别有统计学意义(F=31.2206,P0.05),与空白组比较,模型组大鼠体重增长明显下降(P0.01),而骨疏宁各剂量及仙灵骨葆胶囊、尼尔雌醇片均能对抗维甲酸所致骨质疏松模型大鼠的体重增长缓慢(P0.05或P0.01)。

5.2或p

模型组大鼠股骨的骨密度和骨硬度明显降低,与正常组相比有显著性差异(P0.05或P0.01)。与模型组比较,骨疏宁高、中剂量组及仙灵骨葆胶囊组、尼尔雌醇片组的骨密度和骨硬度均明显升高(P0.01),且骨疏宁高、中剂量作用接近于仙灵骨葆胶囊组和尼尔雌醇片组(P0.05)。

5.3两组患者骨干重、正常组湿重比较

灌服维甲酸后大鼠股骨长度的增长受抑制,与正常组比较有显著性差异