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茯苓不同药用部位三酸类成分hplc指纹图谱研究

椰子是多孔菌科的一种干燥菌核（schw.）。它尝起来又甜又平，属于心脏、肺、脾和肾。具有利尿、补水、健脾、安神的功效。它的化学成分主要是三叶手茯苓酸、三叶手苓酸、树胶、蛋白质和脂肪酸。茯苓始载于《神农本草经》,是著名中成药“桂枝茯苓胶囊”的原材料之一。传统认为茯苓以云南为道地产区,但发展人工栽培以来,湖北、安徽等地均也建立了示范产地,成为茯苓的主产区。为了控制茯苓药材的质量,昝俊峰等对不同产地、不同菌种来源的茯苓药材进行了指纹图谱研究,结果表明,产地对茯苓药材的质量具有重要的影响;张琦等对不同药用部位的茯苓药材进行了UPLC指纹图谱研究,并对药材中的三萜成分进行了定性分析。但是现有文献报道中的药材或药用部位仅限于茯苓皮、茯苓片与茯苓块,尚无HPLC指纹图谱用于鉴定白茯苓、茯神及赤茯苓3个不同药用部位的相关报道。为了探讨该3个药用部位及产地是否存在显著的化学成分差异,本实验首次对收集到的22批不同产地的白茯苓、茯神、赤茯苓药材中的三萜酸类成分进行了HPLC指纹图谱表征和比较,通过对样品HPLC图谱数据进行相似度评价、聚类分析和主成分分析,为全面评价茯苓药材质量提供了依据。

1u3000仪器

Agilent1200型高效液相色谱仪(包含两元泵、柱温箱、在线脱气机、自动进样器、MWD检测器);BP211D型电子分析天平(德国Sartorius公司);Centrifuge5415D高速离心机(德国Eppendorf公司);Milli-QAcademic纯水机(法国Millipore);KQ-250DB型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

茯苓酸对照品为自制,经质谱鉴定,采用峰面积归一化法计算,纯度大于99%;乙腈、三氟乙酸为色谱纯,水为纯化水,甲醇、磷酸、甲酸为分析纯。

2方法和结果

2.1供试样品的制备

取药材粉末5.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇50mL,浸泡30min,然后超声处理60min(功率250W,频率40KHz),放冷,滤过,取续液滤25mL,蒸干(不高于70℃),残渣用甲醇溶解,定容至5mL,离心,即得供试样品。

2.2度洗脱、检测

WatersSymmetryC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0~30min,50%~55%B;30~40min,55%~60%B;40~50min,60%~65%B;50~60min,65%~70%B;60~70min,70%~75%B;70~80min,75%~85%B;80~85min,85%~90%B;85~90min,90%B。检测波长210nm;进样量10μL;柱温30℃;体积流量1.0mL·min-1;理论塔板数以茯苓酸峰计算不低于4000。

2.3椰子材

茯苓药材样品见表1,经吴舟执业药师鉴定为多孔菌科真菌茯苓P.cocos,密封保存于阴凉干燥处。

2.4方法研究

2.4.1溶液稳定性试验

取大别山1白茯苓样品,按2.1项下方法制备,依据2.2项下色谱条件在0,2,4,8,12,18,24,28h分别进样测定,记录色谱图,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0.030%~0.43%和0.35%~4.4%,表明供试品溶液在28h内稳定。

2.4.2仪器精密度试验

取大别山1白茯苓样品,按2.1项下方法制备,依据2.2项下色谱条件,连续进样6次,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0.030%~0.46%和0.35%~2.1%,表明仪器等整个系统的精密度良好。

2.4.3重复性试验结果

取大别山1白茯苓样品,按2.1项下方法制备,平行制备6份,依据2.2项下色谱条件,分别进样测定,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0.020%~0.33%和0.42%~3.87%,表明该分析方法重复性良好。

2.4.4溶剂峰和滞后峰的研究

2.5三、酸有效层析成像-注释

2.5.1hplc指纹谱构建

精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪,依据2.2项下色谱条件,记录色谱峰。

2.5.2指纹图谱

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版,国家药典委员会)建立对照指纹图谱。白茯苓药材的对照指纹图谱见图1,茯神药材的对照指纹图谱见图2,赤茯苓指纹图谱见图3。其中共有的典型色谱峰共16个,分别出现在20.609,22.209,23.595,2