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茯苓多糖的超声波提取工艺研究

椰子茯苓（schw.）是多孔菌科的一种干燥的细菌，具有补水、补水、健脾、安神等功能。茯苓多糖通过增强免疫功能,激活免疫监视系统,抑制肿瘤细胞DNA、RNA合成等机制,发挥抗肿瘤作用。我们采用了超声波提取法提取茯苓多糖。并用正交试验法对提取过程中药材粒度,超声时间,用水量进行了优化研究,用苯酚-硫酸法检测其含量。

1仪器和试剂盒

1.1分析公司

UV-9100紫外分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);超声波清洗器KQ-100型(40kHz)(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2葡萄糖对照品

白块茯苓(购于唐山市某药材站,产地安徽亳州);葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所);苯酚,浓硫酸均为分析纯,6%苯酚(临时配制)。

2方法和结果

2.1标准曲线的制备

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品100mg置于100mL量瓶中,加水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述溶液10mL,于100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得100μg·mL-1的对照品溶液。

精密吸取对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4mL,分别置试管中,迅速加水至2.0mL,各加6%苯酚试液1.0mL,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0mL。摇匀,放置5min,置沸水浴中加热15min取出,再置冷水浴中冷却至室温。另以2.0mL的蒸馏水同样操作,作空白对照,在490nm处测定吸收度,以吸收度对浓度做标准曲线。标准曲线方程为C=18.10694A+0.135702,相关系数r=0.9998,其线性范围是10~140mg·L-1。

2.3超声提取过滤

精密称取茯苓粉末0.1g,置50mL量瓶中,按表1设定的因素,进行超声提取,过滤,取续滤液备用。本试验选取三个主要因素:粉末粒度,超声时间,水量。每个因素拟3个水平,选用了L9(34)正交表。

2.4样品测定

精密吸取续滤液1mL,按标准曲线项下操作,测得吸收度,代入回归方程,得茯苓多糖含量,见表2。

2.5吸收度测定方法吸收度法

精密称取茯苓粉末0.1g,按照优选出的最佳条件超声提取(粒度20目,超声时间20min,水量40mL),过滤,取续滤液,按标准曲线项下操作,在490nm处测得5份样品的吸收度为:A1=0.498,A2=0.503,A3=0.493,A=0.496,A=0.500,根据回归方程求出百分含量分别为:2.93%,2.96%,2.90%,2.92%,2.94%,平均含量为2.93%,RSD=0.76%。

2.6加标回收率实验

精密称取20目茯苓粉末0.04~0.08g5份,加水40mL。超声20min,过滤,取超声后续滤液1mL各加1mL葡萄糖标准液(50mg·L-1),按标准曲线项下操作,计算回收率,平均回收率:99.02%,RSD0.44%。

2.7分散分析

对表2结果进行统计学处理,方差分析结果见表3。

3提取条件影响c

结果表明各因素对提取影响程度依次为:ACB,其中影响最大为粉末粒度,最佳提取条件为A1B2C3,即粒度20目,超声时间20min,水量40mL。