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板蓝根化学成分的分离与鉴定

班兰属植物的脱兰种具有干燥的根、苦涩和寒冷的特点。具有清热解毒、凉血利咽之功效,用于治疗瘟毒发斑、舌绛紫暗、痄腮、喉痹、大头瘟疫、烂喉丹痧、丹毒、痈肿等。主要分布于我国江苏、浙江、福建、河南、广西、台湾等地区。板蓝根在我国传统医学史上应用历史极为悠久,《神农本草经》上品栏中有“蓝实”记载。当今,板蓝根制剂用量之大,堪称中药之最。已报道的板蓝根化学成分有:有机酸类、木脂素类、生物碱类、甾醇类、芥子苷类、含硫类化合物、多种氨基酸、核苷和多糖类。为了进一步确定板蓝根的有效化学成分,本课题对板蓝根的化学成分进行研究,利用柱色谱和高效制备液相色谱法从板蓝根中分离出11个化合物,结构分别确定为:(+)-异落叶松树脂醇(1),(+)-落叶松树脂醇(2),落叶松树脂醇-9-O-β-D-吡喃型葡萄糖苷(3),落叶松树脂醇-4′-O-β-D-吡喃型葡萄糖苷(4),落叶松树脂醇-4,4′-二-O-β-D-吡喃型葡萄糖苷(5),3-甲酰吲哚(6),1-methoxy-3-indolecarbaldehyde(7),1-methoxy-3-indoleacetonitrile(8),deoxyvasicinone(9),表告依春(10),腺苷(11)。还对板蓝根中大孔树脂30%乙醇部分的氨基酸含量进行了测定,发现约有20多种,其中主要是:γ-氨基丁酸、脯氨酸、精氨酸、苏氨酸、缬氨酸,它们的含量依次为2.37%,5.32%,0.40%,0.32%,0.29%。

1薄层色谱和色谱法测定

XT4-100型显微熔点测定仪(温度计未校正)。ESI-MS测定用Agilent1100seriesLC-MSDTrapSL质谱仪。Inova400,500型核磁共振仪。旋光测定用Perkin-Elmer341型旋光仪。薄层色谱用硅胶GF254和柱色谱硅胶(100～200目,200～300目)均为青岛海洋化工厂产品。大孔树脂D101为天津海光化工有限公司产品,C18反相硅胶为日本YMC公司产品,SephadexLH-20(18～111μm)为瑞士Pharmaciabiotech公司产品。制备液相色谱仪为日本ShimadzuLC6A(制备柱:YMC-PackODS-A20mm×250mm,10μm)。

药材采自河南,经河南商丘毛冬青科技开发有限公司蒋成博工程师鉴定为十字花科菘蓝属植物菘蓝I.indigotica的根,标本储存在中国医学科学院药物研究所。

2化合物的分离和分离

板蓝根根茎10kg,粉碎后用70%乙醇回流提取3次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至无醇味,将水液稀释后上D101型大孔树脂柱吸附,分别用30%,60%,95%乙醇溶液梯度洗脱。其中60%乙醇洗脱部分57g,经正相硅胶柱色谱,得到:A～G7个部分。A部分经硅胶柱色谱,以氯仿～氯仿-甲醇(50∶1)为洗脱剂,收集59至64流分,经甲醇-氯仿重结晶得到化合物6(11mg)。第75至79流分,再经正、反相柱色谱得到化合物2(22mg)。第94和95流分,在甲醇-氯仿混合液中析晶得到化合物1(24mg)。G部分反复使用反相色谱法分离得到化合物3(12mg)。30%乙醇部分78.9g依次使用正相柱色谱(甲醇-氯仿梯度洗脱)、反相色谱(甲醇-水梯度洗脱)、反相半制备柱分离(乙腈-水为流动相)得到化合物4(8mg),5(9mg),7(8mg),8(16mg),9(13mg),10(19mg),11(9mg)。

3化合物3甲醇

化合物1白色结晶(氯仿-甲醇),mp135～136℃,[α]25D=+45.8(c0.78,MeOH)。ESI-MSm/z:383[M+Na]+。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δ:1.75(1H,m,8′-H),1.99(1H,m,8-H),2.77(2H,d,J=7.5Hz,7-H),3.39(1H,dd,J=11.0,4.0Hz,9′-H),3.65(1H,overlap,9-H),3.67(1H,overlap,9-H),3.69(1H,overlap,9′-H),3.77(3H,s,3-OCH3),3.80(3H,s,3′-OCH3),3.81(1H,overlap,7′-H),6.18(1H,s,5-H),6.61(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,6′-H),6.66(1H,s,2-H),6.67(1H,d,J=2.0Hz,2′-H),6.73(1H,d,J=7.5Hz,5-H)。13C-NMR(CD3OD,125MHz)的数据见表1。与文献检索对照,最终确定为(+)-异落叶松树脂醇[(+)-isolariciresinol]。

化合物2白色晶体(甲醇),[