食管鳞状细胞癌中epha2与hmlh1、hmsh2mrna的表达.docxVIP

食管鳞状细胞癌中epha2与hmlh1、hmsh2mrna的表达

0逆转录反应与病理研究

癌症是一种常见的消化性肿瘤之一。中国是世界上发病率和死亡率最高的国家。世界上每年有约30万新患者，其中一半以上来自中国。根据流行病学研究，新疆是中国高发区之一。目前，还不知道如何破坏dna基因，以及通过反向反应（rt-pcr）技术对30例新疆维尔伯和30例汉族粗糙组织及相关远距无癌组织的mrna的发现进行了检测和分析。

1材料和方法

1.1病例来源及资料来源

60例食管鳞癌组织标本取自2008-01/2009-05新疆医科大学附属肿瘤医院手术切除标本,维吾尔族和汉族各30例,男43例,女17例,年龄36-75(中位62)岁.60例全部为鳞癌,所有病例术前均未行放疗、化疗.所有标本在离体后30min内迅速取材,每例标本均取癌组织及远端6cm以上的远隔无癌组织两部分置于液氮罐中,然后放于-70℃冰箱中保存.

1.2方法

1.2.1trizelrna的提取

取约0.1g组织,加入1mL预冷的TRIzol提取液,在玻璃匀浆器充分匀浆,其余步骤严格按TRIzolRNA提取试剂盒说明书进行,再用紫外分光光度计检测RNA的含量及纯度,所得RNA溶解于50μLDRPC处理水中.

1.2.2pcr检测taq蛋白表达水平

经过逆转录后再以cDNA为模板扩增.PCR操作步骤严格按照试剂盒说明书进行,主要引物序列见表1,主要扩增片段大小分别为:EphA为204bp,hMLH1为400bp,hMSH2为279bp,GAPDH:300bp.总体系为20μL,其中Taq酶缓冲液10μL,上下游引物各1μL,Mg2+0.4μL,模板cDNA2μL,剩余用水补至20μL,混合离心后30s,取出混匀后的反应体系置于PCR仪中进行扩增,循环次数为35次,扩增产物取6μL在20g/L琼脂糖进行凝胶电泳,在凝胶成像仪上照相和测定分析.

统计学处理所有数据均经SPSS13.0统计软件进行统计学处理,采用χ2检验,P0.05有统计学意义.

2结果

2.1rt-pcr

与标准Marker相比,在204、279和400bp处可见明显亮带,与预期目的片段大小一致(图1).

2.2两组mlh1和hmsh2表达比较

在60例食管鳞癌患者的癌组织和远隔无癌组织中,EphA2在两组织中表达差异有统计学意义(χ2=7.761,P=0.005),其差异表达率为56.7%(癌组织大于远隔无癌组织);hMLH1在两组织中表达差异有统计学意义(χ2=10.231,P=0.001),其差异表达率为75.0%(远隔无癌组织大于癌组织);hMSH2在两组织中的表达差异无统计学意义(χ2=0.261,P=0.609),其差异表达率为81.7%(远隔无癌组织大于癌组织);EphA2表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和民族有关,而与分期、分化程度无关;hMLH1、hMSH2的表达均与食管癌的临床分期有关,而与浸润深度、分化程度、淋巴结转移及民族无关(表2).食管鳞癌中EphA2、hMLH1、hMSH2mRNA三者表达之间的关系(表3).

3eph2表达与限制

在外界的刺激信息传递给细胞核并转化成细胞效应的信号转导通路过程中,具有酪氨酸激酶活性的受体(RTKs)起着重要作用.Eph(erythropoietinproducinghepatomacellular)是RTKs家族成员之一,EphA2是EphA亚家族受体14个成员中的第2个,也是Eph亚家族成员中被发现的具有酪氨酸酶活性的第1个基因编码产物,其广泛表达于人的多种组织或细胞系中,包括皮肤、肺脏、肠道上皮细胞和卵巢组织等.正常上皮细胞EphA2与配体结合,导致自身及下游大量底物酪氨酸磷酸化,从而调节细胞增殖及分化,促进胚胎发育.在癌细胞中,主要以非磷酸化状态存在.近年来研究显示,EphA2在多种肿瘤组织中高表达,包括乳腺癌、肺癌、胃癌等,进一步的研究证实EphA2过表达促进肿瘤向恶性转化及肿瘤的浸润和转移的作用,但EphA2在食管癌中的研究少见报道.

本研究应用RT-PCR方法对食管癌组织和食管远隔无癌组织中EphA2mRNA的表达进行检测,结果显示,EphA2在食管癌组织和远隔无癌组织中均有表达,但EphA2mRNA在癌组织中的表达明显高于远隔无癌组织(P=0.002),而且癌组织大于远隔无癌组织的差异表达率为56.7%,提示EphA2有双重调节作用,一方面参与了正常食管细胞的生长发育,另一方面作为一种重要的致癌基因促进了食管癌的发生和发展.在肿瘤组织中,过表达的EphA2不能与配体很好的结合,丧失了对肿瘤细胞生长和迁移的负调节作用,消弱了肿