NY_T 4422-2023 牛蜘蛛腿综合征检测 PCR法.docxVIP

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CCS?B?43

备案号：XXXX-XXXX

中华人民共和国农业行业标准

ＮＹ?／?Ｔ?4422—2023

牛蜘蛛腿综合征检测 PCR法

Detection?of?arachnomelia?syndrome?in?cattle—PCR?method

2024??05??01?实施2023?－?12?－

2024??05??01?实施

－??－

中华人民共和国农业农村部 发布

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前言

本?文?件?按?照?GB/T１??１—２０２０?标?准?化?工?作?导?则??第?１?部?分?:标?准?化?文?件?的?结?构?和?起?草?规?则??的?规

定起草?.

请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.

本文件由农业农村部种业管理司提出.

S本文件由全国畜牧业标准化技术委员会(AC/TC２７４)归口.

S

本文件起草单位:中国农业大学、新疆农业大学.

本文件主要起草人:王雅春、初芹、焦士会、黄锡霞、谢振全、田月珍、马毅、俞英、张毅、王丹、胡丽蓉.

Ⅰ

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牛蜘蛛腿综合征检测PCR?法

１范围

本文件描述了牛蜘蛛腿综合征检测的?PCR?法.

本文件适用于西门塔尔牛、瑞士褐牛、中国西门塔尔牛、新疆褐?牛、三?河?牛、蜀?宣?花?牛?及?其?他?含?有?西?门

塔尔牛和/或褐牛血缘个体的蜘蛛腿综合征的遗传检测.

２规范性引用文件

下?列?文?件?中?的?内?容?通?过?文?中?的?规?范?性?引?用?而?构?成?本?文?件?必?不?可?少?的?条?款?.?其?中?,注?日?期?的?引?用?文

件?,仅?该?日?期?对?应?的?版?本?适?用?于?本?文?件?;不?注?日?期?的?引?用?文?件?,其?最?新?版?本(包?括?所?有?的?修?改?单?)适?用?于

本文件?.

GB/T１９４９５??２转基因产品检测实验室技术要求

GB/T２７６４２牛个体及亲子鉴定微卫星?DNA?法

B农业部２０３１号公告—１４—２０１３转基因动?物?及?其?产?品?成?分?检?测??普?通?牛?(ostaurus)内?标?准?基?因

B

定性?PCR?方法

NY/T２６９５牛遗传缺陷基因检测技术规程

NY/T３４４６奶牛短脊椎畸形综合征检测?PCR?法

３术语和定义

下列术语和定义适用于本文件.

３??１

l A牛蜘蛛腿综合征arachnomeiasyndrome

l A

一种牛的先天性、致死性骨骼系统畸形、临床表现四肢外观像“蜘蛛腿”的常染色体遗传病.

注:患病犊牛头部畸形,包括下颌骨短,上颌骨向下凹?陷,上?颌?前?端?呈?圆?锥?形,并?向?上?微?微?翘?起;脊?柱?向?背?侧?弯?曲,明?显

“蜷缩驼背”状态,但肋骨和肩胛骨正常;四肢僵直,骨骼畸形,后肢畸形尤为严重,掌骨和跖骨向内侧弯曲与身体平

行或呈一定角度,长骨骨端正常,长骨骨?干?比?正?常?犊?牛?细?而?脆?弱,外?径?和?内?径?偏?小?但?骨?密?质?部?分?的?宽?度?未?发?生?改

变,四肢外观像“蜘蛛腿”.

３[来源:NY/T２６９５—２０１５,??９,有修改]

３

４原理

根据褐牛?AS致因突变位点和西门?塔?尔?牛?AS?致?因?突?变?位?点?的?侧?翼?序?列?设?计?特?异?性?引?物,并?在?上?游

引物５′端分别加上?HEX?和?FAM?荧光标记,随后对?DNA?样品进行?PCR?扩增,获得与预期片段大小一致

的?PCR?产物.PCR?产物变性解链?后,经?毛?细?管?电?泳?技?术?进?行?片?段?分?离,依?据?荧?光?吸?收?峰?图?鉴?定?片?段?长

度,判定基因型,确定被检个体为携带者还是正常个体.

s?ftS注１:褐牛?AS致因突变位点为牛５号染色体上亚硫酸盐氧化酶(ulieoxidase,UOX)

s?ftS

c ??bp之间的１个?G?碱基插入,DNA?上的位置为３６３bp~３６４bp,即表示为c３６３—３６４insG?

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