细胞工程第一次课.ppt

*形态发生植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。植物的离体体细胞胚胎发生指各种外植体、培养细胞、原生质体在培养条件下形成胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞统称为体细胞胚或胚状体）的过程。第31页,共54页，星期六，2024年，5月*2.植物细胞全能性的实现条件与过程条件：使植物细胞处于体外条件下（解除植株其余部分的影响）一定的营养物质和培养条件，适当的刺激第32页,共54页，星期六，2024年，5月*外植体愈伤组织生长点根、芽或胚状体小植株脱分化再分化器官发生营养生长过程胚胎发生第33页,共54页，星期六，2024年，5月*3.植物组织/细胞培养的营养要求和培养条件（1）培养基成分无机盐碳源和能源维生素氮源生长调节剂诱导子第34页,共54页，星期六，2024年，5月*MS组成配制1升（1000毫升）培养基硝酸铵1.65克硝酸钾1.9克氯化钙0.44克硫酸镁0.37克磷酸二氢钾0.17克碘化钾0.83毫克硼酸5.2毫克硫酸镁22.3毫克硫酸锌3.6毫克钼酸钠0.25毫克硫酸铜0.025毫克氯化钴0.025毫克硫酸铁27.8毫克蔗糖30克琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定第35页,共54页，星期六，2024年，5月*（2）培养条件要求光照：强度、光质和光周期湿度：容器内的湿度几乎是100%的相对湿度，二是环境的相对湿度一般要求70～80%。温度：通常24-28℃pH值：5.6-6.0之间气体渗透压第36页,共54页，星期六，2024年，5月*4.植物组织培养五阶段预备阶段：培养室、培养容器、接种工具的准备，培养基制备，选择合适的外植体、表面杀菌。诱导去分化阶段：接种，外植体在含有生长素类激素的培养基中形成愈伤组织（光照非必需）继代增殖阶段：将愈伤组织移植到含有细胞分裂素的培养基中，愈伤组织细胞数大大扩增生根发芽阶段：将愈伤组织移植到含有细胞分裂素的培养基中，使其重新分化成胚状体，继而长成小植株（光照必需）移栽成活阶段第37页,共54页，星期六，2024年，5月*第38页,共54页，星期六，2024年，5月*5.植物组织培养技术的应用（1）植物脱毒植物脱毒：马铃薯、大蒜、甘薯、草莓及许多果树和花卉，由于多代营养繁殖，植株体内积累了大量的病毒，种性退化严重，表现为作物生长受到抑制，形态畸变，产量下降，品质变劣等；而利用茎尖组织培养辅以化学或高温处理，可以较好地起到植株脱毒作用，培养出来的种苗称作脱毒苗。第39页,共54页，星期六，2024年，5月*大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜。果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉。花卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等大蒜：留种量占产量的五到八分之一。马铃薯：留种量占产量的十分之一。贝母：留种量占产量的三分之一。第40页,共54页，星期六，2024年，5月*脱毒技术在感染病毒的植株中，病毒的分布是不一致的。在老叶片及成熟组织和器官中，病毒含量较高，但幼嫩的和未成熟的植物部位，病毒的含量较低，而在生长点约0.1～1毫米时，则几乎不含病毒颗粒。这是由于病毒的繁殖运输速度与茎尖细胞生长速度不同所致。在茎尖分生组织中，细胞繁殖十分迅速，病毒还来不及侵入，因此就成为植物体相对无病毒`的特殊区域。第41页,共54页，星期六，2024年，5月*植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5毫米带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。由于所取的外植体很小，分离难度大，一般在解剖镜下操作。培养无病毒所用的器具必须严格消毒，克服培养中的污染也是成败的关键。第42页,共54页，星期六，2024年，5月*脱毒效果检测指示植物鉴定(testplants)所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。血清鉴定(serologictest)试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。第43页,共54页，星期六，2024年，5月*（2）快速繁殖技术快速繁殖