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乳酸/GPR81/ERK在HIIT促进小鼠大脑皮质血管生成中的作用及机制

摘要

研究目的

高强度间歇训练（High-intensityintervaltraining,HIIT）是近年来兴起的一种

有氧与无氧相结合的新型运动方式，对人体具有多方面积极影响，已被证明可改

善脑灌注，防治脑血管疾病。乳酸水平迅速升高是HIIT的重要特征，也是其发

挥效应的重要媒介。有研究表明，乳酸受体GPR81介导了HIIT促进小鼠脑血管

生成。此外，ERK1/2信号通路与血管生成密切相关，但ERK是否介导乳酸/GPR81

的促血管生成效应，目前尚不清晰。因此，本实验采用在体、离体实验结合的方

法，探究乳酸/GPR81/ERK在HIIT促进大脑皮质血管生成中的作用。

研究方法

在体实验：30只9周龄C57/BL6J小鼠随机分为对照组（Control组）和高强

度间歇运动组（HIIT组），对HIIT组进行为期6周，每周5次，每次1小时的

HIIT。训练结束后通过免疫荧光染色（Anti-CollagenⅣ）观察小鼠大脑皮质微血

管密度；蛋白质印迹法检测大脑皮质胶原蛋白Ⅳ（CollagenⅣ）、乳酸受体GPR81、

细胞外调节蛋白激酶（p/t-ERK1/2）、血管内皮生长因子（VEGF）和血管内皮生

长因子受体（VEGFR2）的蛋白表达。

离体实验：培养小鼠大脑微血管内皮细胞系（bEnd.3），取第四至六代细胞进

行实验。首先，为探究ERK在乳酸调控血管生成中的作用，设置对照组（C组）、

乳酸组（L组）和乳酸+ERK抑制剂组（LE组）进行不同干预；其次，为探究

ERK在GPR81调控血管生成中的作用，设置对照组（C组）、GPR81激动剂（G

组）和GPR81激动剂+ERK抑制剂组（GE组）进行不同干预。干预后，通过

CCK-8法检测各组bEnd.3细胞增殖能力；细胞划痕实验检测各组bEnd.3细胞迁

移能力；Matrigel成管实验检测bEnd.3细胞成管能力；蛋白质印迹法检测细胞

GPR81、p/t-ERK1/2、VEGF和VEGFR2蛋白表达情况。

研究结果

在体实验：

1.与对照组相比，单次运动后HIIT组小鼠血乳酸显著升高（p＜0.001）。

2.与对照组相比，6周HIIT促进小鼠大脑皮质微血管密度和微血管总长度

增加（p＜0.05），CollagenⅣ蛋白表达增加（p＜0.05）。

3.与对照组相比，6周HIIT可上调小鼠大脑皮质GPR81蛋白表达（p＜

0.05）及ERK1/2磷酸化水平（p＜0.05）。

4.与对照组相比，HIIT组小鼠大脑皮质VEGF表达水平无显著差异，但可

上调VEGFR2表达（p＜0.05）。

离体实验：

1.与对照组相比，乳酸可促进bEnd.3细胞的增殖（p＜0.05）、迁移（p＜

0.05）和成管（p＜0.01）能力。

2.与对照组相比，GPR81激动剂可促进bEnd.3细胞的增殖（p＜0.01）、迁

移（p＜0.01）和成管（p＜0.05）能力。

3.与乳酸组相比，乳酸和ERK抑制剂联合干预可降低细胞的增殖（p＜0.01）、

迁移（p＜0.001）和成管（p＜0.01）能力。

4.与GPR81激动剂组相比，GPR81激动剂和ERK抑制剂联合干预可降低

细胞增殖（p＜0.01）、迁移（p＜0.001）和成管（p＜0.001）能力。

5.乳酸可上调细胞GPR81蛋白表达（p＜0.05）、ERK1/2（p＜0.05）磷酸化

水平，还可上调VEGF（p＜0.05）和VEGFR2（p＜0.05）的蛋白表达。

6.GPR81激动剂可上调细胞ERK1/2磷酸化水平（p＜0.05）和VEGF、

VEGFR2的蛋白表达（p＜0.05）。

7.ERK抑制剂可减弱GPR81激动剂对VEGF蛋白的上调作用（p＜0.05）。

研究结论

1.HIIT可促进小鼠大脑皮质血管生