酶工程制药课件.pptVIP

(4)評價固定化酶（細胞）的指標1.固定化酶活力測定單位;每毫克幹重每分鐘轉化底物的量活力回收率=固定化酶總活力/加入酶的總活力相對活力＝固定化酶總活力/（加入酶的總活力－上清液中未偶聯的酶活力）2.偶聯率及相對活力的測定偶聯率＝（加入酶活力－上清液酶活力）/加入蛋白活力*3.半衰期，即酶的活力降為初活力一半時所經歷的連續操作時間。T1/2表示4.熱穩定性：將固定化酶在不同溫度下溫育1h，在最適溫度下測酶活力，一般保持在60%以上*三、酶感測器（一）原理它將活性物質酶覆蓋在電極表面,酶與被測的有機物或無機物反應,形成一種能被電極回應的物質。1967年Updick和Hicks將固定化的葡萄糖氧化酶膜結合在氧電極上,做成了第一支葡萄糖電極；此後,這類酶感測器通常是通過檢測產物H2O2的濃度變化或氧的消耗量來檢測底物。***用葡萄糖氧化酶電極測定血液、尿、發酵液中的葡萄糖濃度；用脲酶電極測定血液中的尿素濃度**（二）酶感測器主要類型酶催化特定底物發生反應,從而使特定生成物的量有所增減.用能把這類物質的量的改變轉換為電信號的裝置和固定化酶耦合,即組成酶感測器.依據信號轉換器的類型,酶感測器大致可分為酶電極(主要包括離子選擇電極、氣敏電極、氧化還原電極等電化學電極)、酶場效應電晶體感測器(FET-酶)和酶熱敏電阻感測器等*（1）酶電極固定化酶與各種電極結合的傳感裝置。一般用凝膠包埋成薄膜，與電極相連。*電位型電極1．離子選擇電極對特定的離子呈選擇性回應的電極，快速、靈敏、可靠、價廉，應用範圍很廣。在生物醫學領域也常直接用它測定體液中的一些成分（如H+，K+，Na+，Ca2+等）。2．氧化還原電極

不同於離子選擇電極的另一類電位型電極．這裏指的主要是零類電極。*電流型電極感測器中採用電流型電極為信號轉換器的趨勢日益增加，與電位型電極相比有以下優點：（1）電極的輸出直接和被測物的濃度呈線性關係，不像電位型電極那樣和被測物濃度的對數呈線性關係．（2）電極輸出值的讀數誤差所對應的待測物濃度的相對誤差比電位型電極的小．（3）電極的靈敏度比電位型電極的高．*氧電極有不少酶如氧化酶和加氧酶在催化底物反應時要用溶解氧為輔助試劑，反應中所消耗的氧量就用氧電極來測定．目前用得最多的氧電極是電解式的Clark氧電極，Clark氧電極是由鉑陰極、Ag/AgCl陽極、KCl電解質和透氣膜所構成。當將氧電極插入含有溶解氧的溶液後，溶液中的O2將擴散，透過透氣膜到達鉑陰極表面被還原，還原電流值與溶解氧的量有關．**（2）熱敏電阻酶感測器將酶催化的熱量轉化為電信號穩定性好，靈敏度高，價格低*（3）離子敏場效應電晶體酶感測器（ISFET）對離子或分子敏感的半導體器件ISFET與常用的絕緣柵型場效應電晶體構造相同．不過在輸入柵極做了一些改進，以能與特定的化學物質反應，產生電位的酶膜取代金屬極．讓酶膜直接與溶液接觸，由於酶膜對溶液中的離子有選擇作用，從而調製ISFET的漏電流變化，利用這個特性就能檢測一溶液中的離子活度．**（4）光纖感測器酶固定在光學透明的載體上，構成生物敏感膜，酶與底物反應引起穿越酶膜的光的性質變化，檢測光信號*第四節固定化酶和固定化細胞的反應器用於酶進行催化反應的容器及其附屬設備稱為酶反應器。酶催化反應過程示意圖過程調控生物反應器消毒原料預處理產物分離提純產品生物催化劑製備空氣除菌能量熱量*常見的酶反應器類型按結構區分攪拌罐式反應器（StirredTankReactor,STR）鼓泡式反應器(bubblecolumnreactor,BCR)填充床式反應器(packedcolumnreactor,PCR)流化床式反應器(FluidizedBedReactor,FBR)膜反應器(MembraneReactor,MR)按操作方式區分分批式反應(batch)連續式反應(continuous)流加分批式反應(feedingbatch)混合形式連續攪拌罐反應器（ContinuousStirredTankReactor,CSTR）分批攪拌罐反應器（BatchStirredTankReactor,BSTR）*一、反應器的類型和特點⒈間歇式攪拌罐反應器用於游離酶反應後隨即放料。又稱為批量反應器（BatchReactorBSTR）。特點：底物與酶一次性投入反應器內，產物一次性取出；反應完成之後，固定化酶（細胞）用過濾法或超濾法回收，再轉入下一批反應。